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- 上海羽朵生物
- YD6579
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- 2025年07月15日
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大量
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上海羽朵生物
- 英文名：
参考说明书
- 规格：
规格齐全
(YD048)（50ML纯化量）
试剂原理：
本试剂盒利用不同蛋白需要的沉淀试剂和沉淀条件不同，通过大量实验分析验证而得到的一个与传统沉淀纯化有较大不同的精细的具有高活性、高产率、快速以及良好重复性的单克隆抗体的纯化方法。
试剂特点：
本试剂盒特点在于纯化操作的简单化、所得抗体的高活性和高纯度。实验表明，本试剂盒可以得到85-90%左右纯度的抗体；并且由于配方考究，抗体在纯化过程中几乎没有损伤，完全保持应有的活性，实际应用极好。
适用范围：
本试剂盒适用于小鼠IgM类单克隆抗体腹水的纯化，其它类或者亚类单抗的快速纯化请使用本公司其它货号产品。
试剂组成：
| 试剂名称 | 数量 | 试剂名称 | 数量 |
| 纯化液A | 50ml | 透析试剂（固体粉末） | 配5L量 |
| 纯化液B | 50mL | 透析袋 | 2份 |
| 纯化液C | 50mL | 说明书 | 1份 |
| 纯化液D | 50mL | 空白不干胶标签 | 2片 |
- 从冰箱中取出试剂盒开盖放置室温，然后再将单克隆抗体腹水从冰箱中取出，室温避光复温15分钟，随后用自来水边冲边摇匀快速解冻。
- 将化开的单克隆抗体腹水12000RPM 20-30℃(或室温)离心10-20分钟。
- 先吸弃最上面浮沫和油脂，然后将上清转出到另一个干净容器或离心管；按每1毫升单克隆抗体腹水加入纯化液A（加前确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可） 1毫升（必须精确），室温避光倒转30分。
- 8000RPM 20-30℃离心10-20分钟，沉淀用纯化液B溶解到原单克隆抗体腹水1/2体积，再按此体积每1毫升加入纯化液C （加前确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可）1毫升（（必须精确），室温避光倒转10分钟。
- 8000RPM 20-30℃离心10-20分钟，弃沉淀收集上清；每1毫升上清液加纯化液D（加前确定没有试剂析出，如有析出摇晃溶解即可） 1毫升（必须精确），室温避光倒转20分钟。
- 8000RPM 20-30℃离心10-20分钟，收集沉淀用纯化液B收集溶解沉淀到原单克隆抗体腹水体积的1/2。
- 透析袋用PBST浸泡3-5分钟，然后用手揉捏数次，自来水冲净后接纯水冲洗干净，将纯化好的抗体放入用透析夹或绳扎紧。
- 透析液用纯水溶解透析试剂粉末到5L，将要透析的抗体袋子放入。抗体体积：透析液体积=1:50，4℃搅拌透析每次2小时，共不少于3次。
- 12000RPM 4℃离心10-20分钟，收集上清测蛋白浓度并调控在5mg/ml左右最后加10/万NaN3防腐并除菌过滤4℃备用。
- 溶血严重和腐败的腹水不得用于纯化。
- 离心温度不能超过37℃。
- 操作和量取试剂要细致精准,否则影响纯度。
- 不搅拌透析每次静置透析时间不得低于2小时。
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文献和实验上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 小鼠IgM 定量 EIA 试剂盒使用说明 原理 本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。用抗小鼠 IgM 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 IgM 与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB ，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在 4 50 nm 处测 OD
（1）体内诱生法 取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5 ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。 （2）体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。近年来，各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产
内或体外培养而分泌的抗体单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb或Mab）。单克隆抗体仅针对一种抗原决定簇，具有很高的特异性。单克隆抗体通常用抗原免疫小鼠制备。将免疫的脾细胞（含产生抗体的B细胞）与小鼠肿瘤细胞融合，分离杂交瘤细胞，接种于小鼠腹腔，产生的腹水中含有浓度很高的单克隆抗体。（三）抗原抗体反应 1、可逆性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag•Ab.。抗体的亲和力（affinity）是抗原抗体间的固有结合力，可以平衡常数K
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