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- 2025年07月13日
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上海羽朵生物
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参考说明书
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规格齐全
小鼠单抗Ig类/亚类鉴定用ELISA试剂盒使用说明书
(YD060)
一、试剂原理：本试剂盒利用双抗体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克隆抗体或特异亲和纯化的单克隆抗体的类
和亚类
（可区分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）。采用小鼠抗体共有位点的二抗包被微孔板，与加入的培养上清中的小鼠抗体结
合，再加入HRP标记的抗小鼠各类、亚类的抗体来分别反应，最后用TMB底物系统显色并用稀硫酸终止，再通过酶标仪检测吸
光度来判断被测单克隆抗体的类或亚类。本试剂盒具有极高的分辨率，是您鉴定小鼠单克隆抗体类、亚类的可靠工具。
二、组成成分：
酶标板含自封袋 2 个 2ⅹ96 孔标本稀释液 15ml
通用阳性对照 1ml 显色剂 A 15ml
通用阴性对照 1ml 显色剂 B 15ml
酶标二抗 6 种 6×4ml 反应终止液 15ml
20×清洗液 60mL 加样图 2 份
封板膜 4 张说明书 1 份
三、使用范围：用于杂交瘤细胞培养上清中小鼠单克隆抗体Ig类、亚类的鉴定以及相关内容的研究。
四、使用方法：
1、首先将试剂盒恢复室温（大约30分），然后用纯水把清洗液配成工作浓度（一份浓缩清洗液加19 份纯水）。
2、取出酶标板。每个标本需要6 孔，阳性对照6 孔，阴性对照6孔。多余的用自封袋保存，记得放入干燥剂。
3、将细胞培养上清（或特异亲和纯化的抗体）50μl 加入酶标微孔板，每个标本加6 孔，阳性对照和阴性对照也是各加6 孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl 标本稀释液。贴上封板膜37℃温育30-40 分钟。
4、弃去板内液体，洗板5 遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，
通用阳性对照的6 孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30-40分钟。
5、吸弃板内液体，洗板5 遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂A和显色剂B 各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20-30分钟。
6、本试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig 类或亚类。更可将反应终止液（每孔50μl）终止反应后用酶标仪450nm测定波长，630nm参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig 类或亚类(阳性对照OD一般不小于0.8，阴性对照一般不高于0.12，阳性判定标准：样品OD大于阴性OD+0.15，阴性OD低于0.05按0.05算)。
五、产品特点：高灵敏度、高特异性、结果容易判定。
六、保存条件：不开启2-8℃避光保存效期一年。不正确存放或过于频繁开启使用有可能因此使效期缩短。
七、注意事项：
1、虽然本试剂盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。
2、在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的C030215抗体鉴定试剂。它会给您带来满意的结果。
3、手洗板子时一定要把孔加满，停留10 秒然后弃尽，最后要拍干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。
4、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好，随盒存放。
5、拿放板子时不要剧烈抖动，以免孔间交叉污染出现错误结果。
6、本试剂一般不会出现两个阳性，但出现两个阳性的现象不论在进口或国产试剂中都是真实存在的，一般会一个OD很高,另一个很低但却还能判为阳性，实验分析表明这种情况下以OD高值孔为准，出现这种情况有多重原因：1、培养的细胞中有“饲养细胞”残留，2、抗体本身存在变异，3、融合的淋巴细胞取自不纯的BALB/C，4、样品为非特异亲和纯化的抗体或样品是腹水，5、上清出现少量污染，6、实验操作粗放，7、加错试剂。
7、阳性对照数据并不完全一样，仅作为有效指示。
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文献和实验质） 各种不同类别的Ig都含有4条多肽链组成的基本结构单位，即2条相同而分子量较大的重链（H链）和2条相同而分子量较小的轻链（L链）；重链和轻链之间以及重链和重链之间均借链间二硫键共价结合和分子内非共价稳定的Ig分子结构；在重链上尚结合着糖链，故Ig又属糖蛋白 轻链和重链一级结构的氨基酸序列差异，可分为可变区（variable region,V区）和恒定区（constant region,C 区）V区氨基酸高度变异，而C区氨基酸基本恒定； V区和C区三级结构保持相对独立，各自通过一个链内二硫键形成一肽环
(λ)，同一个天然Ig分子上L链的型总是相同的。正常人血清中的κ：λ约为2：1。 2．重链（heavy chain,H链） 重链大小约为轻链的2倍，含450～550个氨基酸残基，分子量约为55或75kD。每条H链含有4～5个链内二硫键所组成的环肽。不同的H链由于氨基酸组成的排列顺序、二硫键的数目和们置、含的种类和数量不同，其抗原性也不相同，根据H链抗原性的差异可将其分为5类：μ链、γ链、α链、δ链和ε链，不同H链与L链（κ或λ链）组成完整Ig的分子分别称之为IgM、IgG、IgA、IgD
)与lambda(λ)，同一个天然Ig分子上L链的型总是相同的。正常人血清中的κ：λ约为2：1。 2．重链（heavy chain,H链） 重链大小约为轻链的2倍，含450～550个氨基酸残基，分子量约为55或75kD。每条H链含有4～5个链内二硫键所组成的环肽。不同的H链由于氨基酸组成的排列顺序、二硫键的数目和们置、含的种类和数量不同，其抗原性也不相同，根据H链抗原性的差异可将其分为5类：μ链、γ链、α链、δ链和ε链，不同H链与L链（κ或λ链）组成完整Ig的分子分别称之为IgM、IgG、IgA
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