流式课堂 | 流式实验对照设置之 FMO

大部分老师做流式实验时，会用到空白对照、单阳对照、同型对照、生物学对照等，用到 FMO 对照的比较少。尽管如此，FMO 对照在设置圈门时仍具有重要的参考价值。

一方面，FMO 对照有助于精确地设置阴阳性群体界限。我们在做多色实验时，可能会出现某些通道信号难以区分的情况，主要是因为其他某个荧光对该通道的干扰很大。FMO 对照（Fluorescence Minus One，荧光扣除一）减少了其中一个通道的荧光抗体，能够帮助衡量其它通道的荧光漏溢情况。

如下图所示，PerCP/Cyanine5.5 的单阳管有明显的分群，而全染管无法分群，通过 FMO 对照（扣除 PE 的多色结果），PerCP/Cyanine5.5 的通道信号又出现较明显的分群，证明 PE 对 PerCP/Cyanine5.5 通道的干扰较大（不同仪器的滤光片稍有不同，会导致不同通道的干扰有差异，请依据具体仪器通道做分析）。

另一方面，FMO 可以作为某些指标的阴性对照，用来排除全染的背景影响，便于更准确地划门。

如图所示：如果以空白管来确定阴性细胞群，通常会以灰色线作为 PE 的阴性细胞群划门，可能会导致实验组结果出现偏差。如果加入 FMO 对照，则 PE 的阴阳性分群上移到红色线处，这样划门的数据更准确。

其它注意事项

● 为了保证设门的准确性，FMO 对照组需要用相同的细胞做实验，以确保实验无其他原因干扰。因此，不能用微球补偿来代替；

● 如果实验样本需要固定破膜，则 FMO 也要做相同操作。