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- 2025年07月13日
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-20℃
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6个月
- 库存：
1000
- 供应商：
钰博生物
| 产品名称：ClonFast无缝组装试剂盒 产品编号： 产品规格：10/25T ClonFast无缝组装试剂盒 保存方法：-20℃保存，1-2年 |
产品介绍
本试剂盒是一种新的、快速、简洁的克隆方法。利用重组原理，无需内切酶和连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，载体构建仅需30分钟。适合任何载体，可以在载体的任意位置进行基因克隆，操作简便、快捷。
ClonFast无缝组装试剂盒
产品应用及优势
灵活的位点选择：可以在载体的任意位置进行基因克隆。
快速简便：PCR产物不需末端补平。载体只需线性化，不需去磷酸化载体。
精确：表达产物不增加任何额外的氨基酸。
多用途：适用于各种自备载体、插入片断、或者酶切位点。
克隆效率高：高达90%阳性克隆。
高通量操作，批量克隆（可以用8 连管，24、48、96 孔板做高通量克隆）。
ClonFast无缝组装试剂盒
产品应用
适用于向几乎任何载体在任何位点进行多片段拼接克隆
• 无需考虑插入片段自身携带的酶切位点
• 可一次实现多至五个插入片段的顺序拼接
• 线性化克隆载体和PCR产物可不进行纯化直接克隆
yb-1148 QGY-7703(肝癌细胞)
yb-1149 NCI-H446 [H446](小细胞肺癌细胞)
yb-1150 QGY-7701(肝癌细胞)
yb-1151 BEL-7405(肝癌细胞)
yb-1152 NCI-H460 [H460](大细胞肺癌细胞0
yb-1153 NCI-H460 [H460](大细胞肺癌细胞0
yb-1154 BEL-7404(肝癌细胞)
yb-1155 BEL-7402(肝癌细胞)
yb-1156 QG-56(肺扁平上皮癌细胞)
yb-1157 SPC-A-1(肺腺癌细胞)
yb-1158 HGC-27(胃癌细胞（未分化）)
yb-1159 LTEP-a-2(肺腺癌细胞)
yb-1160 AGS(胃腺癌细胞)
yb-1161 MGC80-3(胃癌细胞)
yb-1162 95-D(高转移肺癌细胞)
yb-1163 BGC-823(胃腺癌细胞（低分化）)
yb-1164 BT549(乳腺管癌细胞)
yb-1165 SGC-7901(胃腺癌细胞)
yb-1166 T-47D(乳腺管癌细胞)
yb-1167 T-47D(乳腺管癌细胞)
yb-1168 TE-11(食管癌细胞)
yb-1169 SK-BR-3(乳腺腺癌细胞)
yb-1170 SK-BR-3(乳腺腺癌细胞)
yb-1171 TE-10(食管癌细胞)
yb-1172 ZR-75-30(乳腺癌细胞)
yb-1173 TE-1(食管癌细胞)
yb-1174 Bcap-37(乳腺癌细胞)
yb-1175 Eca-109(食管癌细胞)
yb-1176 MDA-MB-453(乳腺癌细胞)
yb-1177 CNE(鼻咽癌细胞)
yb-1178 JAR(胎盘绒毛癌细胞)
yb-1179 HEp-2(喉表皮样癌细胞)
yb-1180 NIH:OVCAR-3(卵巢癌细胞)
yb-1181 KB(口腔表皮样癌细胞)
yb-1182 SK-OV-3(卵巢癌细胞)
yb-1183 Acc-3(涎腺腺样囊性癌细胞)
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文献和实验上篇我们对经典分子克隆技术和无缝组装克隆技术进行了比较，经典分子克隆兜兜转转、如琢如磨，而无缝组装克隆技术却能做到操作简单和方便快捷。那它究竟是如何实现的呢？本期我们就来具体聊聊无缝克隆的四步致胜奇招。 无缝组装克隆之 Step 123——带你飞，把还在用传统方法“琢磨”的他甩在后面 基于同源序列的无缝组装克隆技术，关键是利用 PCR 引物，在目标片段两端引入与线性化载体两端同源的一段序列。基本策略是 选定插入外源片段的位置，以此线性化载体 设计包含线性化载体两端序列和目标片段两端序列的引物
本领。 经典分子克隆技术vs无缝组装克隆技术 技术总是随着时间向前发展的，由难到易，化繁为简，将不能变为可能。分子克隆技术的发展完美体现了这一点。 以构建表达载体为例，经典分子克隆中，要将目标片段插入载体，全靠内切酶的拆分和连接酶的拼接。关键是选择合适的酶切位点，使得酶切“拆”得的目标片段末端和相应载体末端正好能互补“拼”在一起，连接酶才能连起来。选择酶时首先不能破坏目标基因完整性（包含从起始密码到终止密码）及载体完整性；其次，尽量避免选两个酶切生成粘端一样的（粘端互补）——两边粘端一样的载体“偏爱
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
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