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- 2025年07月14日
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6个月
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1000
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钰博生物
| 产品名称：ClonFast无缝克隆试剂盒 产品编号： 产品规格：20/50T ClonFast无缝克隆试剂盒 保存方法：-20℃保存，1-2年 |
产品介绍
本试剂盒是一种新的、快速、简洁的克隆方法。利用重组原理，无需内切酶和连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，载体构建仅需30分钟。适合任何载体，可以在载体的任意位置进行基因克隆，操作简便、快捷。
ClonFast无缝克隆试剂盒
产品应用及优势
• 灵活的位点选择：可以在载体的任意位置进行基因克隆
• 简便、快捷：PCR产物不需末端补平。载体只需线性化，不需去磷酸化载体
• 精确：表达产物不增加任何额外的氨基酸
• 多用途：适用于各种自备载体、插入片段、或者酶切位点
• 效率高：高达90%阳性克隆
• 高通量、批量克隆：可以用8连管，24、48、96孔板做高通量克隆
ClonFast无缝克隆试剂盒
产品应用
载体DNA片段克隆
载体DNA转移
蛋白质表达
应用合成生物学
代谢工程
高通量克隆
yb-1119 K-562(慢性髓原白血病细胞)
yb-1120 Hce-8693(盲肠腺癌细胞(未分化))
yb-1121 HEL299(红白细胞白血病细胞)
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文献和实验上篇我们对经典分子克隆技术和无缝组装克隆技术进行了比较，经典分子克隆兜兜转转、如琢如磨，而无缝组装克隆技术却能做到操作简单和方便快捷。那它究竟是如何实现的呢？本期我们就来具体聊聊无缝克隆的四步致胜奇招。 无缝组装克隆之 Step 123——带你飞，把还在用传统方法“琢磨”的他甩在后面 基于同源序列的无缝组装克隆技术，关键是利用 PCR 引物，在目标片段两端引入与线性化载体两端同源的一段序列。基本策略是 选定插入外源片段的位置，以此线性化载体 设计包含线性化载体两端序列和目标片段两端序列的引物
1. 质粒载体构建不成功（目的片段和载体不能成功连接）的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差：体系中的杂质会降低连接效率，如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体，可以考虑进行纯化后再进行连接； ②目的片段和载体片段使用比例悬殊，或者用量过多或过少：目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内，否则会影响连接效率，具体比例可以草靠连接酶说明书； ③连接条件不当：比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等，可以通过设置对照组来排查原因； ④引物设计问题：比如通过无缝克隆的方式进行连接，同源
设计工作，一般很多软件都可以进行引物设计，例如pirmer5之类的软件。除了常用的酶切连接的方法也可以使用无缝克隆的方法构建，选用哪种方法我们都要在引物设计的时候考虑到，酶切连接的方法和无缝克隆引物设计注意点如下：1） 无缝克隆方法设计引物的时候要加入同源重组臂序列。2） 做酶切连接引物设计要注意加上保护碱基，保护碱基大部分加入4个碱基可以满足大多数内切酶，也可以参照限制性内切酶保护碱基添加表加保护碱基。在扩增前我们应了解目的片段是否有高GC、或者重复序列之类的特殊序列，还有片段长度都会影响实验，不推荐一次
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