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- 2025年07月15日
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- 技术资料
- 保存条件：
4℃保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
LY2228820
- 库存：
1
- 供应商：
上海信裕
对于贴壁生长的LY2228820，相对来说比较简单但很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的LY2228820。
在讨论之前，大家首先要有一个概念，即洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。
所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。
处理方法如下：
1）.将污染的LY2228820培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。
2）.继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。
3）.继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。
4）.重复步骤3再洗。
5）.重复步骤3再洗。
6）.加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
7）.加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
8）.再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。
9）.加入10ml培养液，加入2ml双抗，将换好新的培养液LY2228820放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。
10）.24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养LY2228820，培养体系加入2ml双抗.
11).24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。
以上是对于细菌污染（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）；若为霉菌或者真菌污染，加入两性霉素B清洗和培养，终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml时会有细胞毒性）。另外也可以选择在LY2228820培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同；预防为主！！所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！尤其注意血清的质量！这个是主要来源。一般建议用北美血清。
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以上方法主要是针对贴壁生长的LY2228820，在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止LY2228820脱落。
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文献和实验刘淼清 在园中看到关于LY294002和Wortmannin区别。（建议用LY，主要原因有两个，一，Wortmannin相对来说要贵好多；二，更重要的，Wortmannin半衰期很短，如果没记错的话大概只有8－10小时，所以如果处理时间久的话，药物浓度下降很快。有篇文献研究了Wortmannin的半衰期，有兴趣可以去查查看，应该是2005年的文献。 ） 这篇文献不知有哪位战友知道。 第二 LY294002的半衰期是多少
olivial 最近在做细胞内信号转导通路PI-3K-Akt，关于它的抑制剂LY 294002的配制，说明书上写用DMSO，在做实验时设了vehicle（含等量DMSO）组，但发现DMSO对细胞（小胶质细胞）有影响，且DMSO与干预药有协同作用，MTT结果显示DMSO浓度>=0.1%即对细胞造成损伤，而任何浓度DMSO（0.01%~0.1%）都与干预药有协同作用，乙醇的结果亦如此。所以想请教，大家在配LY时是怎么配的？在使用LY时是否遇到了上述问题
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