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Human Retinal Pigment Epithelial Cell Genomic DNA
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文献和实验吸出培养瓶中的培养基,用PBS液洗涤1-2次; 加入已经在37度预热的消化液(0。25%胰酶+0。02%EDTA)少量(估计可以平铺培养瓶底部即可); 在镜下看到细胞退缩变园,立即给予少量培养基终止消化,我一般的消化时间就在1分钟之内很好消化; 再用弯管吹打细胞成单细胞悬液后,按1:2或1:3分瓶即可。
相关专题 实验原理:在去污剂SDS及EDTA存在下,通过蛋白酶K消化细胞蛋白质,RNA酶消化RNA获得细胞基因组DNA。本方法获得的DNA可用于Southern杂交及构建文库 。 一、实验材料: 1.细胞消化缓冲液: 100mM NaCL 10mM Tris·CL (PH=8.0) 25mM EDTA (PH=8.0) 0.5% SDS (生工) 0.1mg/ml蛋白酶K(储存液20mg/ml,在-20
上皮层。以PBS液漂洗眼杯2次,吸干; 4. 加入0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液,置于无菌的烧杯中。于37℃恒温箱中消化30min; 5. 吸去消化液。用PBS液稍洗。加入有血清培养液终止消化酶的作用,并用毛细吸管轻轻吹打眼杯内壁,以使视网膜色素上皮细胞脱落; 6. 收集眼杯内的细胞悬液,离心(800r/min)8min; 7. 弃上清液,将沉淀的视网膜色素上皮细胞重新用培养液悬浮。计数; 8. 以8×104—10×104
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