人牙周膜成纤维细胞裂解液

牙周膜成纤维细胞PDLC的传代

倒去培养基，先加入PBS1ml，再加入0.25％胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使之分布均匀；约10秒。将培养瓶迅速转至镜下观察，镜下见细胞触角变钝，细胞变圆，将瓶侧立回到无菌台内，到掉胰酶，加入2mlDMEM培养基（内涵20%胎牛血清），终止消化，弯管吹打成单细胞，可再在镜下观察，确定是否吹打完全。按1：3或1：2传代，加入适量新鲜培养基后，1.5-2.0ml。放入CO2培养箱。注意：时间宁短勿长。宁愿消化不足也不能消化过，PDLC细胞不能等到细胞长融合再传代，长到80％左右就可以传代

单细胞凝胶电泳的操作流程与注意事项

： 1. 取100 μl于45 ℃水浴中保温的0.5%NMA，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。盖玻片推匀，不能有气泡，4度凝固5至8分钟。 2. 水平取下盖片，取100 μl于37 ℃水浴中保温的0.5%LMA与20μl细胞悬液(约400个细胞)混匀，立即铺片，加上盖玻片，4度凝固5至8分钟。 三、细胞裂解与电泳： 1. 将制备好的胶板去掉盖玻片后，浸于4 ℃预冷的细胞裂解液中，在4 ℃下裂解2.5到3小时。 2. 取出胶板，用双蒸水浸没漂洗

磷酸化蛋白 WB 做不好？文献指出了你可能忽略的重要原因

进行实验，则磷酸化 c-Src 丢失[4] 。就是说使用溶液法提取的蛋白谱是不完整的，蛋白有非等比例的丢失，内参也有可能存在丢失情况，那么如果做磷酸化蛋白定量，就会出现数据偏差。β整联蛋白是一种磷酸化蛋白，使用 Chaps 进行原代鸡胚成纤维细胞蛋白质提取，Chaps 不可溶组分使用 RIPA 裂解液再次提取，RIPA 不可溶组分再使用 sample buffer 提取，在五次采样（见下图）中，在 Chaps 不可溶组分和 RIPA 不可溶组分中都发现了大量的整联蛋白[5] 。caveolin