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文献和实验免疫金银染色方法敏感、简便、省时、安全可靠，葡萄球菌A蛋白（SPA）金标记四步法是在此基础上发展起来的更为敏感的一种新方法。SPA和许多哺乳类动物IgG具有亲和性，且它们之间的连接不会干扰抗原——抗体的结合。简单的SPA金标记二步法后，第三步用抗SPA与SPA金表面分子通过Fab或Fc段相结合，结果结合更多的胶体金颗粒，再通过银增强，使原始信号得到几何级放大，其染色原理见图。双PAG免疫金银染色原理（一）染色流程：（1）石蜡切片常规脱蜡至水，0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×3min
（一）石蜡切片IGSS（1）切片脱蜡至水。（2）0.1%胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修复20min（98℃），自然冷却至室温。（3）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×3min.（4）l%EA（卵蛋白）15min,不洗。（5）适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.（6）0.05m01/L（pH7.4）TBS洗3×5min.（7）0.02m01/L（pH7.4）TBS（内含0.1%BSA）洗10min.（8）1%EA 15min,不洗，1:10~1:20稀释
免疫金银染色（immuno gold silver staining，IGSS）
免疫金银染色（immunogoldsilverstaining，IGSS）是在金免疫技术基础上发展起来的更为敏感的技术，由Holgate在1983年首先建立成功。 一、原理 金免疫技术测定的产物上的金颗粒可将银离子还原成银颗粒，在金颗粒表面形成一色泽更深的黑色层，因而增强了金免疫技术的敏感性（图19-3）。 图19-3 免疫金银染色原理示意图 二、方法
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