免疫金银染色（IGSS）操作流程

（一）石蜡切片IGSS

（1）切片脱蜡至水。

（2）0.1%胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修复20min（98℃），自然冷却至室温。

（3）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×3min.

（4）l%EA（卵蛋白）15min,不洗。

（5）适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.

（6）0.05m01/L（pH7.4）TBS洗3×5min.

（7）0.02m01/L（pH7.4）TBS（内含0.1%BSA）洗10min.

（8）1%EA 15min,不洗，1:10~1:20稀释的PAGlonm室温孵育1h,或37℃孵育30min.

（9）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗10min.

（10）1%戊二醛洗10min.

（11）双蒸水洗5min.

（12）1%明胶洗5min.

（13）银避光显影8~15min.

（14）双蒸水洗15min.

（15）固定：用显影定影液（1:4或1:10）固定5min,也可以用15%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1~3min,或用1%戊二醛固定5min,50℃温水洗3~6min.

（16）衬染，核固红衬染3min或甲基绿衬染3min.

（17）常规脱水，二甲苯透明，常规树胶封片。

（18）镜检：阳性物质呈黑色或黑褐色，颗粒分布于抗原-抗体反应部位；背景较干净，呈红色。

胃未分化癌IGSS-P53              HCC IGSS-HBsAg
核内内呈黑色阳性表达，背景为红色，×400    细胞浆内呈黑色阳性，×200

（二）冰冻切片IGSS

做冰冻切片的组织可先经过固定再作切片，也可先制作冰冻切片，然后再固定。这要根据保存抗原的需要而定，固定过的组织可用含20%蔗糖的PBS（0.1mol/L,pH7.4）浸泡过夜，使切片减少冰结晶，保持组织细胞良好的形态结构。切片人0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×3min,染色步骤同石蜡切片。