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- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
电泳PCR实验
电泳PCR实验
动物组织直接PCR试剂盒（UNG）的主要特点：
| 产品名称 |
描述 |
规格 |
货号 |
| 动物组织直接PCR试剂盒（UNG） Animal Tissue Direct PCR Kit (UNG) |
动物组织一步法PCR，同时采用UNG防污染体系，无需单独抽提DNA，快速，灵敏，准确 |
50 ×20μl rxns |
TP-0112T |
| 200 ×20μl rxns |
TP-01121 |
||
| 500×20μl rxns |
TP-01122 |
||
| 2000 ×20μl rxns |
TP-01123 |
实时PCR实验具体方法
1.SYBRGreen法：
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图（单一峰图表明PCR扩增产物的单一性）
2.TaqMan探针法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。
二、服务流程
1、引物设计与合成
2、DNA/RNA抽提
3、反转录（针对RNA）
4、上机定量分析
三、客户提供
1、全血、组织或细胞。
2、引物。
3、基因信息：目的基因名称、物种和序列（或GenBank Accession Number）。
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文献和实验后，以微量移液器吸出矿物油，并取出5 μL PCR 反应产物，进行洋菜胶体电泳分析。
的 DNA 聚合酶活性：以 RNA 为模板合成 cDNA 第一条链； (2) Rnase 水解活性：水解 RNA:DNA 杂合体中的 RNA； (3)依赖 DNA 的 DNA 聚合酶活性：以第一条 DNA 链为模板合成互补的双链 cDNA. 二、RT-PCR的准备 1. 引物的设计及其原则： (1)引物的特异性决定 PCR 反应特异性。因此引物设计是否合理对于整个实验有着至关重要的影响。 在引物设计时要充分考虑到可能存在的同源序列，同种蛋白的不同亚型，不同的 mRNA 剪切方式以及可能存在
4 Polynucleotide Kinase，混匀。（2） 使用水浴或PCR仪，37℃反应10分钟。（3） 加入1微升探针标记终止液，混匀，终止探针标记反应。（4） 再加入89微升TE，混匀。此时可以取少量探针用于检测标记的效率。通常标记的效率在30%以上，即总放射性的30%以上标 记到了探针上。为实验简便起见，通常不必测定探针的标记效率。（5） 标记好的探针最好立即使用，最长使用时间一般不宜超过3天。标记好的探针可以保存在-20℃。2. 探针的纯化：通常为实验简便起见，可以不必纯化标记好的探针。在有些时候，纯化后的探针会
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