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人DNA(胞嘧啶-5)甲基转移酶(Dnmt1)

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    概述
    Dnmt1能识别半甲基化DNA的5´…CG…3´位点，甲基化其胞嘧啶残基(1,2)。现认为哺乳动物Dnmt1有致癌、促进胚胎发育和其他生物功能(3-5)。在细胞循环S期的DNA复制阶段，就发生了大量的甲基化现象(6)。
    来源
    以人Dnmt1 cDNA为模板，从杆状病毒表达系统中表达出来(1,7)。
    反应条件
    1X Dnmt1反应缓冲液
    [50 mM Tris-HCl (pH 7.8), 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 5%甘油]，加入100 μg/ml BSA和160 μM SAM。37°C温育。

    随酶提供
    10X Dnmt1反应缓冲液

    100X BSA
    32 mM S-腺苷甲硫氨酸(SAM)
    质保声明
    无核酸内、外切酶污染。

    单位定义
    1单位指在25 μl反应体系中，37°C条件下30分钟催化1 pmol的甲基基团转移到聚dl.dC底物上所需要的酶量。

    浓度
    2,000 units/ml。
    贮存条件
    50 mM Tris-HCl (pH 7.5)，1 mM EDTA，200 mM NaCl，1 mM DTT和50%甘油。贮存于-20°C。

    热失活
    65°C 20分钟。
    注意事项
    如果应用于DNA的修饰和保护，建议选用M.SssI(NEB #M0226)，因该酶能同时有效地对未甲基化和半甲基化的底物DNA进行甲基化。

    参考文献
    (1) Pradhan,S. et al. (1999) J. Biol.Chem .274,33002-33010.
    (2) Bacolla,A. et al. (1999) J. Biol Chem . 274, 33011-33019.
    (3) Schmutte,C. et al (1998) J. Biol. Chem . 379, 377-388.
    (4) Laird, P. W. et al. (1995) Cell 81, 197-205.
    (5) Li, E. et al. (1992) Cell 12, 915-926.
    (6) Leonhardt, H. et al. (1992) Cell 71, 865-873.
    (7) Yen, R. W et al. (1992) Nucleic Acids Res .20, 2287-2291.

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