M13KE 噬菌体

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更新日期2026年02月04日

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Ph.D.试剂盒组成

■ 10 次独立淘选实验的足量噬菌体展示库，10 ⁹ 个克隆
■ –28 gIII 测序引物（100 pmol）
■ –96 gIII 测序引物（100 pmol）
■ E.coli 宿主菌 ER2738
■ 对照实验靶分子（链霉亲和素）和洗脱剂（生物素）
■ 详细的使用手册

概述

噬菌体展示是一种体外筛选技术。它可以将一系列多肽或蛋白质文库展示在噬菌体颗粒的外部，而编码这些蛋白的 DNA 则位于病毒颗粒内部（1-3）。利用展示蛋白与其编码 DNA 之间的这种物理联系，我们可以通过一种简单的称为“生物淘选”的体外筛选方法（4），快速筛选出给定靶分子（抗体、酶、细胞表面受体等）的亲和配体。最简单的淘选方法是（见图1）：将展示不同多肽的噬菌体文库与固定在平板或小珠上的靶分子孵育，先洗去未结合的噬菌体，而后洗脱特异性结合的噬菌体。扩增洗脱下的噬菌体。重复上述结合洗脱过程，使展示了与靶分子结合的多肽序列的噬菌体分子富集。经过 3-4 轮筛选后，通过 DNA 测序或 ELISA 鉴定分子克隆。

NEB 提供 3 种随机肽库和供自制肽库所需的 M13KE克隆展示载体。这 3 种肽库包括 7 肽库（Ph.D.-7），12 肽库（Ph.D.-12）和受约束于二硫键的环 7 肽库（Ph.D.-C7C）。Ph.D.-C7C 随机肽库所展示的多肽两侧各加了一个半胱氨酸。噬菌体组装时经过氧化，形成环化的多肽。所有肽库的容量超过 20 亿个克隆。上述 3 种肽库表达的随机肽均在噬菌体次要包膜蛋白 pIII 的 N 端，故每一个病毒粒子可以表达 5 个拷贝。Ph.D.-7 和 Ph.D.-12 肽库表达的展示肽就是展示肽本身，不含有其它额外氨基酸，但是 Ph.D.-C7C 表达的展示肽前含有 Ala-Cys。所有的肽库在展示肽和 pIII之间存在连接肽段（Gly-Gly-Gly-Ser）。

展示在噬菌体表面的随机肽库已被应用于多种领域，包括绘制抗原表位图谱(图2)、研究蛋白质与蛋白质相互作用及酶抑制剂，并且还用于发现 GroEL、HIV、半导体表面、小分子荧光团和药物的肽配基。通过对纯化的受体和完整细胞进行淘选，已经鉴定出了具生物活性的受体配基。通过体外淘选分离出来的具有细胞特异性的靶多肽，已成功地运用于该细胞基因的传递。应用本系统，也能鉴定霉菌孢子和细菌细胞的配基，如：在体内、外均可特异抑制炭疽霉素的多肽。此外，本系统还适用于体内淘选组织特异性多肽，将噬菌体注射到活体动物体内，采集相应的器官，然后再从中分离出具有组织特异性的噬菌体。

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M13KE 噬菌体
M13KE 噬菌体来源于 Ph.D.克隆载体 M13KE 感染病毒颗粒的悬浮液（1）。载体噬菌体可作为对照在噬菌体 ELISA 中使用，也可用于噬菌体存储的浓度测定。Ph.D.多肽展示克隆系统（NEB #E8101）包含有已提取的 M13KE 噬菌体复制型。

参考文献：
(1) Noren, K.A.and Noren, C.J.(2001) Methods, 23,169–178.

#N0316S 0.04 ml ¥1,269

抗 M13 pIII 单克隆抗体
抗 M13 pIII 单克隆抗体（鼠 IgG2a 同型物）来源于鼠骨髓瘤细胞和脾细胞融合产生的 A23 杂交瘤。BALB/c 小鼠是用 M13 衣壳蛋白 III C 端一半的肽段（259-406 残基）进行免疫。

注意：不建议用此抗体做 ELISA 来鉴定噬菌体，因为 M13 噬菌体上的抗原决定簇不易暴露。

#E8033S 0.1 ml ¥2,649

pMAL-pIII 载体
pMAL-pIII 载体具有 M13 pIII 的前导序列，其指导经Ph.D.噬菌体展示肽库筛选到的序列转移进入表达载体。

#N8101S 10 µg ¥949

参考文献

(1) Sidhu, S.S.et.al.(2003) Chembiochem ., 4, 14–25.
(2) Azzazy, H.M.and Highsmith, W.E.(2002) Clin.Biochem. ,35, 425–445.
(3) Rodi, D.J.et.al.(2002) Curr.Opin.Chem.Biol .,6, 92–96.
(4) Parmley, S.F.and Smith, G.P.(1988) Gene , 73,305–318.

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NEB的M13噬菌体
噬菌体： M13KE T7宿主细胞： ER2738 BL21/BLT5403/BLT5615噬菌体释放方式： M13噬菌体溶源性，不裂解宿主菌。极大地简化了每轮淘选过程中的噬菌体纯化步骤，只用简单的PEG沉淀方法即可。 T7是裂解性的，其展示的蛋白不需分泌。这一优点使更多的序列可能被展示。但不利于提纯。融合方式：M13噬菌体N端与pIII蛋白融合，不适合克隆cDNA，因为cDNA中为oligo d(T))常位于翻译终止密码子的下游。T7噬菌体C端与T7基因10 衣壳
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我根据分子克隆上的经典方法提取M13噬菌体单链DNA，第一次就成功。但是随后几次，试剂和方法都一样，在可以看见噬菌体白色沉淀的基础上（量足够多），却怎么也提不出来，最后乙醇沉淀时，一片空白。请求各位大侠指点迷津。谢谢 ! 既然首先可以成功，说明方法肯定没问题。建议： 1、检查你的试剂有无污染； 2、操作有无问题（虽然可能性小，但有时很难想到的）； 3、也可以换用其他方法，做个对照。推荐一个快速的用NaI法噬菌体DNA提取的方法，是NEB公司噬菌体展示