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K.lactis 蛋白表达试剂盒

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    试剂盒中单独出售的成分
    pKLAC2 载体
    #N3742S     20 μg           ¥3,309
    pKLAC1-mal E 对照质粒
    #N3741S     20 μg            ¥3,309
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    #M0273L       2,000 units         ¥1,209
    #M0273X      4,000 units          ¥2,409
    dNTP 混合液
    #N0447V      每种 4 μmol            ¥339
    #N0447S      每种 8 μmol*          ¥669
    #N0447L      每种 40 μmol        ¥3,029
    *现在也提供 4×0.2 ml 的包装。
    ♦ 可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因

    ♦ 可同时表达多个基因
    ♦ 无需昂贵的抗生素或甲醇
    ♦ 易操作的实验步骤，适用于无酵母表达经验者
    ♦ 有吸引力的商业授权
    概述
    K.lactis 蛋白表达试剂盒提供了一种在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis )中表达目的基因的简便方法。目的基因克隆入整合表达载体pKLAC1，可在细胞内表达，也可分泌表达。
    K.lactis 蛋白表达系统具有其它酵母和细菌表达系统所不能比拟的几个优势。首先，乳酸克鲁维酵母高培养密度及整合多拷贝质粒的能力，使其可成功制备大量的高表达蛋白质；其次，pKLAC1使用强LAC4启动子，该启动子已经被修饰，故在大肠杆菌中无背景表达，因此，可用于对大肠杆菌有毒性的基因表达；再有，试剂盒提供了高效转化的K.lactis 感受态细胞，使得该系统适用于需要大量转化子的实验，比如利用cDNA文库进行表达克隆；另外，酵母转化子的筛选不需要昂贵的抗生素，培养基中也不需要甲醇；最后，K.lactis 细胞表达的蛋白质可以进行翻译后修饰，因而可成为其它一些表达系统的有用替代。
    K.lactis蛋白表达试剂盒组成
    ♦ pKLAC1 质粒和pKLAC1-mal E 对照质粒

    ♦ SacII

    ♦ 整合测序引物套装

    ♦ K.lactis GG799 感受态细胞和转化试剂

    ♦ 酵母碳基础培养基

    ♦  乙酰胺溶液
    蛋白质的分泌过程
       
    在细胞核中，整合表达载体编码了一个含有 α-MF 结构域（蓝色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表达后，位于 α-MF 上的信号
    肽就会指导融合蛋白转运至内质网（ER），信号肽即被信号肽酶（SP）切除。融合蛋白质转运至高尔基体，Kex 蛋白酶在此将 α-MF 结构域切除。随后，目的蛋白质被分泌到细胞外。
     
    K.lactis 的蛋白表达

     

    SDS-聚丙烯|酰胺电泳分离检测分泌性的重组麦芽糖结合蛋白（MBP），菌体生长在富含蛋白胨（peptone）的培养基中，直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K lactis细胞培养液（15 μl）；泳道 3：整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K lactis 细胞培养液（15 μl）。
    参考文献
    (1) Colussi, P.A. and Taron, C.H. (2005) Appl. Environ.Microbiol ., 71, 7092–7098.

    (2) Read, J.D. et al. (2007) Appl. Environ . Microbiol .,73, 5088–5096.

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      　　 促进血液凝固的脂溶性维生素， K是 Koagu-lation的缩写。也称抗出血性维生素。作为具此作用的物质已从天然物中分离出 K1 ， K2 ，以及合成出 K3 ， K4 ，它们都是萘醌的衍生物。维生素 K1 亦称为叶绿醌， C3 1 H46 O2 ，黄色油状。维生素 K2 亦称为金合欢醌或甲基萘醌 C41 H36 O2 。维生素 K3 就是 2-甲基 1， 4萘醌（ menadione），它是人工合成的代表性物质，有特殊臭味，作为维生素作用

    • 单词 K

      Karyotye (核型)：一个细胞或种属中整个染色体物质。 Kilobase, kb (千碱基)：1000 个DNA 碱基对或1000 个RNA 碱基的缩写。 Kinase (激酶)：磷酸化(加上一个磷酸基团) 底物的酶，蛋白质激酶的底物是其它蛋白质的 氨基酸，分为酪氨酸特异性及丝氨酸/苏氨酸特异性激酶两类。 Kinetic complexity (动力学复杂度)：DNA 复性动力学检测的DNA 成分的复杂度。 Kinetochore (动粒纤维)：染色体的结构

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