K.lactis 蛋白表达试剂盒

pKLAC2 载体
#N3742S     20 μg           ¥3,309

pKLAC1-mal E 对照质粒
#N3741S     20 μg            ¥3,309

SacII
#R0157V    1,000 units       ¥289
#R0157S    2,000 units       ¥569
#R0157L    10,000 units   ¥2,549

K.lactis GG799 感受态细胞
#C1001S         5 rxns      ¥2,829

整合测序引物套装
#S1281S                        ¥1,809

酵母碳基础培养基
#B9017S        12g             ¥309

BstXI
#R0113V          500 units         ¥319
#R0113S         1,000 units       ¥629
#R0113L          5,000 units    ¥2,789
pKLAC1-GLuc 对照质粒
#N3034S           20 μg          ¥3,309

整合测序引物套装
#S1281S          50 μg/ml       ¥1,809

Taq DNA 聚合酶
（随酶提供 ThermoPol 缓冲液）
#M0267V      200 units             ¥139
#M0267S      400 units             ¥269
#M0267L       2,000 units       ¥1,209
#M0267X      4,000 units        ¥2,409

Taq DNA 聚合酶
（随酶提供标准缓冲液）
#M0273V       200 units              ¥139
#M0273S       400 units              ¥269
#M0273L       2,000 units         ¥1,209
#M0273X      4,000 units          ¥2,409

dNTP 混合液
#N0447V      每种 4 μmol            ¥339
#N0447S      每种 8 μmol*          ¥669
#N0447L      每种 40 μmol        ¥3,029

*现在也提供 4×0.2 ml 的包装。

♦ 可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因

♦ 可同时表达多个基因

♦ 无需昂贵的抗生素或甲醇

♦ 易操作的实验步骤，适用于无酵母表达经验者

♦ 有吸引力的商业授权

K.lactis 蛋白表达试剂盒提供了一种在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis )中表达目的基因的简便方法。目的基因克隆入整合表达载体pKLAC1，可在细胞内表达，也可分泌表达。
K.lactis 蛋白表达系统具有其它酵母和细菌表达系统所不能比拟的几个优势。首先，乳酸克鲁维酵母高培养密度及整合多拷贝质粒的能力，使其可成功制备大量的高表达蛋白质；其次，pKLAC1使用强LAC4启动子，该启动子已经被修饰，故在大肠杆菌中无背景表达，因此，可用于对大肠杆菌有毒性的基因表达；再有，试剂盒提供了高效转化的K.lactis 感受态细胞，使得该系统适用于需要大量转化子的实验，比如利用cDNA文库进行表达克隆；另外，酵母转化子的筛选不需要昂贵的抗生素，培养基中也不需要甲醇；最后，K.lactis 细胞表达的蛋白质可以进行翻译后修饰，因而可成为其它一些表达系统的有用替代。

♦ pKLAC1 质粒和pKLAC1-mal E 对照质粒

♦ SacII

♦ 整合测序引物套装

♦ K.lactis GG799 感受态细胞和转化试剂

♦ 酵母碳基础培养基

♦  乙酰胺溶液

   

在细胞核中，整合表达载体编码了一个含有 α-MF 结构域（蓝色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表达后，位于 α-MF 上的信号
肽就会指导融合蛋白转运至内质网（ER），信号肽即被信号肽酶（SP）切除。融合蛋白质转运至高尔基体，Kex 蛋白酶在此将 α-MF 结构域切除。随后，目的蛋白质被分泌到细胞外。

 

SDS-聚丙烯酰胺电泳分离检测分泌性的重组麦芽糖结合蛋白（MBP），菌体生长在富含蛋白胨（peptone）的培养基中，直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K lactis细胞培养液（15 μl）；泳道 3：整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K lactis 细胞培养液（15 μl）。

(1) Colussi, P.A. and Taron, C.H. (2005) Appl. Environ.Microbiol ., 71, 7092–7098.

(2) Read, J.D. et al. (2007) Appl. Environ . Microbiol .,73, 5088–5096.