K.lactis GG799 感受态细胞

农杆菌感受态细胞的制备方法

的0.1mol/L NaCl悬浮菌液。 5.4℃、5000r/min，离心5min，弃去上清液。 6.用1ml冷的CaCl2 (20mmol/L)悬浮，分装成50μl/管，液氮中冷冻后至-80℃保存。 农杆菌感受态细胞的制备： 1.试剂配制：solution1 ： Rbcl 1.21g 100mM MgCl2.4H2O 1.02g 50mM K-Acetate 0.29g 30mM CaCl2.2H2O 0.15

感受态细胞的制备及溶液配制

的起始培养 液） ，冰浴10-15min，4℃ 4,000rpm/min离心 10min。 6. 弃上清，沉淀重悬于 4mlTB（1/12.5 体积的起始培养液） ，冰浴10min。 7. 加入 280μl DMSO，缓缓滴入并轻轻摇晃，使其充分混合均匀，冰浴 10min。 8. 将菌液分装于 EP 管中，- 80℃或液氮冻存。 9. 取两管感受态细胞分别加入 1μl 无菌 ddH2O（阴性对照）和 1μl 纯质粒（阳性 对照）进行转化（见后） ，以检测感受态的质量阴。性对照平板

大肠杆菌感受态细胞的制备与重组质粒转化

；（3）适量的溶菌酶能提高转化率。2、酶受体假说――感受态细胞的表面形成一种能接受DNA 的酶 位点，使DNA分子能进入细胞。证据是：（1）蛋白质合成的抑制剂如氯霉素，可以抑制转化作用；（2）细胞分裂过程中，一直有局部原生质化，但感受态只在生长对数期的中早期出现；（3）分离到感受态因子，能使非感受态细胞转变为感受细胞。目前对感受态细胞的转化理论尚未有统一结论，但是许多实验室一直进行探索，试图从实验中获得明确回答。有人根据pBR322 质粒DNA对E・coli K――12X1776菌株的转化结果，认为：近来