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DNA 聚合酶 I (E. coli )

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    应用：
    ♦ DNA切刻平移法制备高比活性的探针(3)
    ♦ 合成cDNA第二条链 (4,5)


    质量保证：
    无核酸内、外切酶污染。


    ♦ DNA切刻平移（3）

    ♦ cDNA第二条链的合成（4，5）


    概述：
    DNA 聚合酶 I 是DNA依赖性 DNA 聚合酶，具有3´→5´和5´→3´核酸外切酶活性(1) 。当该酶的5´→3´外切酶活性使DNA切刻的5´端移去一个核苷酸后，聚合作用会使切刻3´端补上一个新的核苷酸，因此切刻便沿着DNA分子合成方向移动，使切刻平移成为可能。


    来源：
    重组E. coli 菌株，含有过表达的polA 基因。


    反应条件：
    1X NEBuffer 2 [50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2 , 1mMDTT (pH 7.9 @ 25°C)]。加入dNTPs (不随酶提供)。当添加dNTPs时，DNA聚合酶I在四种NEBuffer中都有活性。


    单位定义：
    1单位指37°C条件下，30分钟内能催化10 nmol 的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。


    活性检测条件：
    1X NEBuffer 2中加入33 μM dNTPs，包括[3 H]-dTTP和70 μg/ml的变性鲑鱼精DNA。


    浓度：
    10,000 units/ml。


    贮存条件：
    25 mM Tris-HCl (pH 7.4),0.1 mM EDTA, 1 mM DTT和50%甘油，贮存于-20°C


    热失活：
    75°C 20分钟。


    使用注意事项：
    本品不含DNase I，因此在做切刻平移反应时需额外添加DNase I。


    参考文献：
    (1) Lehman, I.R. (1981). In P.D. Boyer (Ed.), The Enzymes Vol 14A, (pp.16–38). San Diego: Academic Press.
    (2) Murray, N.E. and Kelley, W.S. (1979) Molec. Gen.Genet ., 175, 77–87.
    (3) Meinkoth, J. and Wahl, G.M. (1987). In S.L. Berger and A.R. Kimmel (Eds.), Methods in Enzymology Vol.152, (pp. 91–94). San Diego: Academic Press.
    (4) Gubler, U. and Hoffmann, B.J. (1983) Gene , 25, 263–269.
    (5) D´Alessio, J.M. and Gerard, G.F. (1988) Nucleic Acids Res ., 16, 1999–2014.


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