生长素GHRELIN放免试剂盒操作说明书

生长素GHRELIN放免试剂盒操作说明书

GHRELIN （HY-10034） RIA KIT

GHRELIN是一种含28个氨基酸残基的脑肠肽，主要由胃黏膜的内分泌细胞分泌，是生长激素促分泌素受体(GHS-R)的一种内源性配体,1999年由日本国立循环器病中心Kojima等[1]人从小鼠和人的胃组织中成功分离并鉴定.Ghrelin系由28个氨基酸构成的多肽,能够和GHS-R结合而刺激生长激素GH的分泌.就目前的研究报道来看,Ghrelin除调节生长激素分泌外,还在能量平衡、胃功能、心血管系统以及肿瘤生长等诸多方面表现出重要的生物学效应.

标本采集：采血前试管内加放抑肽酶30ul/5ml（含150 IU以上）和10%EDTA.Na2 30uL，采血后立即置冰中，30分钟内4℃下2000转/分，离心15分钟取血浆置-20℃待测，可保存3-6个月。

药盒组成：

1、GHRELIN抗体一瓶。 2、¹²⁵I-GHRELIN 标记一瓶。

3、缓冲液一瓶。 4、分离剂（第二抗体）一瓶。

5、GHRELIN标准品1瓶,倍比稀释浓度为：10、 20、40、80、 160、320、640、1280ng/ml

生长素GHRELIN放免试剂盒操作说明书测定方法：

ghrelin ­ RIA 操作程序 （单位：ul）

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试 剂 T NSB S₀ S₁~S₆ 样 品

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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——

标 准 品 —— —— —— 100 ——

样 品 —— —— —— —— 100

抗 体 —— —— 100 100 100

¹²⁵I-ghrelin 100 100 100 100 100

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摇匀，4℃ 24小时

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分 离 剂 —— 500 500 500 500

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混匀，室温放置20分钟，4℃3500转/分 离心15分钟，去上清，测定沉淀cpm值。

结果计算：

以N/T、B/T计算NSB、S₀结合百分率，以B/B₀计算标准及待测物结合百分率，

在半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.

生长素GHRELIN放免试剂盒操作说明书注意事项：

本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释

本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释

本月药盒标准品每瓶用 ml缓冲液稀释

本月药盒有效期为一个月，分离剂在使用前充分混匀（不可冰冻）

测定前，血浆标本推荐过C18拄。

附：血浆标本过柱步骤：

1、取0.5ml血浆和0.5ml含1%的TFA(缓冲液A )，在4℃下3500转/分 离心20分钟，取上清。

2、在含60%乙晴溶液中加1%TFA，即为缓冲液B，将缓冲液B 3ml对Sep-Pak C₁₈ 柱进行平衡，接着用缓冲液A 3ml 冲洗。

3、将1处理的上清血浆缓慢注入Sep-Pak C₁₈柱中。

4、用缓冲液A 5ml 以1ml/2分钟速度淋洗Sep-Pak C₁₈ 柱。

5、再用缓冲液B 3ml淋洗Sep-Pak C₁₈，速度为1ml/3分钟，并收集上述淋洗液。

6、将上述淋洗液全部分别装入10ml西林瓶中，-42℃ 冷冻干燥 ，备用。

7、取干燥后的西林瓶用500 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解，并在振荡器上振荡3分钟。实验

时取200ul进行加样。操作步骤见说明书。

Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 药盒不提供上述二种

试剂（或材料）。

正常参考值：55.25-95.140ng/ml 78.25±11.29ng/ml

本月药盒参考数据：

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T NSB S₀ S₁ S₂ S₃ S₄ S₅ S₆ S₇ S₈

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CPM

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N/T% B₀/T% B/ B₀ %

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