重组蛋白酶K

目录号：MPTK-1（1g）

目录号：MPTK-10（10g）

 

 

 

简介

蛋白酶K是现有蛋白酶中活性最高的品种之一，来源于林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）的蛋白酶K基因。本产品是由重组酵母表达的基因重组蛋白质，在酶分子结构设计上，参考国内外文献，做了六个定点突变，理论上可以提高酶活性50倍。

蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。在pH 4到pH 12的条件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的降解。此酶经脱色和色谱纯化去除了RNA和DNA，也检测不到其它杂酶活性。

由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，主要用在基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶，也可以用于提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质。譬如DNA疫苗和肝素的制备等。

 

基本信息

• 货号：MPTK
• 规格：每个独立包装中含有100毫克的蛋白酶K（或者客户包装）
• 比活性值： ≥30 U/mg干重。
• 来源种属：林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）
• 分子质量：29,730

 

贮存和使用：

干粉状态可在0~4ºC条件下低温保藏。溶解后分装为适当体积，-20ºC贮存。运输可在室温下进行。

正确的贮存条件下，干粉状态的有效期可达一年。液体状态在-20ºC有效期为半年。打开包装使用后，如果在2~8ºC环境下放置超过一周时间，建议过滤除菌或增加稳定剂，防止微生物污染。

贮存和稀释缓冲液：50 mM Tris-HCL缓冲液,2mM CaCL2 (pH 8.0)。

 

质量控制：

• 活性单位定义：37ºC、pH 7.5条件下，每分钟可水解底物酪蛋白生成1 µmol酪氨酸的蛋白酶K 的量，定义为一个单位（U）。
• 脱氧核糖核酸酶残留：以λ DNA为底物，37ºC消化6小时以上，未检测到脱氧核糖核酸酶活性。
• 核糖核酸酶残留：25ºC消化16小时以上，未检测到核糖核酸酶活性。

 

酶活测定和稳定性试验:

(1) 酶活测定 Sigma-Aldrich 方法：

(2)纯度和消化蛋白测试（SDS-PAGE）

结果:  蛋白质纯度超过 99% （激光扫描 SDS-PAGE胶）

(3)  稳定性测试：（一年数据）

结论：冻干粉正确储存一年内活性不变；液体酶酶活半年内降低小于5%。