大量质粒提取柱子

实验操作篇

臂区域如果 GC 含量过高过低，或者有重复序列，都可能在核酸外切酶切割后形成发卡结构，影响重组效率，可以使用质粒设计软件来检查同源重组臂的设计。 ⑤插入序列本身的问题：有些序列本身存在连接载体困难、连接产物不稳定、连接产物在大肠杆菌中复制困难等问题。对于这类序列可以考虑将序列打断后分步构建，或者更换载体或感受态的方式尝试解决。   2. 质粒提取量不足   质粒提取量少常见的原因可能是： ①摇菌时间过长：大肠杆菌生长已经超过对数期，细菌老化，导致细胞和 DNA 降解。 ②摇菌时间不足：细菌生长不充分

Omega质粒DNA中量提取流程

加入1/10体积的ETR，颠倒7-10次后溶液变得浑浊，冰浴10-20min。 10. 42°C水浴5min后，25°C，3，000-5，000xg离心5min，ETR溶液将在管底形成蓝色分层。离心后，如果溶液中有大量的液滴悬浮，静置10分钟让液滴自然沉降。 11. 转移上清液移至离心管中，加入0.5倍体积无水乙醇(室温)，混匀后室温静置1-2min。 12. 将HiBind® 中量柱装在15ml收集管中。转移20ml混合液至柱子內，室温下3，000-5，000xg离心

蛋白样品制备中各类杂质和杂蛋白的去除

蛋白样品制备中，在细胞破碎之后，既可以利用特定蛋白质的特性来分离某一类蛋白质，比如亲和纯化，比如前面介绍的磷酸化蛋白富集，或者膜蛋白富集；另外一个考虑方向是去除杂质----去掉样品中某些非目标高丰度蛋白或者杂质的干扰，同样可以达到简化样本的目的。当然要小心「倒洗脚水的时候别把婴儿也倒掉了」，一定要选择可靠的产品。 比如，潜在疾病标志物的最好样本来源就是血清或其他体液，此类样本可以提供人蛋白质组中绝大部分组份。然而用蛋白质组分析方法鉴定疾病标志物最大的挑战来自于血清中大量的高丰度