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文献和实验一、目的 了解聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的基本原理和操作技术。二、原理 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶,是由丙烯酰胺单体和少量交联剂在催化剂和加速剂的作用下发生聚合反应而制得的。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。 聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构,其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度来加以控制。一般分离蛋白质选用7.5%聚丙烯酰胺凝胶,分离比较大的分子,如核糖体核酸时则用2.5%凝胶。
→处理→加邻苯二胺→测定 ② VB2 测定:称样→加盐酸→匀浆→样品、标样加醋酸-醋酸钠缓冲液→过滤→测定→加连二亚硫酸钠→测定 五、关键步骤与注意事项 1、加入的活性炭要适量; 2、邻苯二胺盐酸盐溶液在空气中颜色变暗,影响显色,现用现配; 3、由于抗坏血酸和核黄素遇光分解,所以整个操作过程应避光;
四甲基偶氮唑盐分析是将四甲基偶氮唑盐还原成甲蜡的颜色,形成紫色,从而来测定活细胞中的酶活性,由于这些试剂能够抑制细胞的活力和生长特性,该方法常用来测量毒性蛋白以及有毒物质。 一、材料和试剂 1. MTT:四甲基偶氮噻唑蓝(Sigma) 2. DPBS缓冲液(Invitrogen) 3. 一般的化学品(Sigma) 二、步骤 1. 96孔板中,每孔种植500~10 000个细胞,每孔体积200 ul。留8个孔不种植细胞,做空白
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