聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳——细菌蛋白的分离

一、目的

了解聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的基本原理和操作技术。

二、原理

聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺单体和少量交联剂在催化剂和加速剂的作用下发生聚合反应而制得的。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。

聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度来加以控制。一般分离蛋白质选用7.5%聚丙烯酰胺凝胶，分离比较大的分子，如核糖体核酸时则用2.5%凝胶。

凝胶电泳具有电泳和分子筛的双重作用其分辨力较高。

三、器材

1、电泳议（600V）及盘状电泳槽

2、电泳玻璃管（用碱性较低的玻璃管），内径5~7mm，长80~100mm

3、玻璃架（制胶时用来垂直插放玻璃管）

4、微量注射器或微量吸管

5、带长针头的注射器

6、日光灯

7、带有玻璃珠或玻璃棒的一小段乳胶管

四、试剂和材料

1、细菌培养物

2、贮液和工作溶液按下表配制

贮液及工作溶液的配制

表中 试剂 :Acr——丙烯酰胺：Bis——亚甲基双丙烯酰胺；TEMED——四甲基乙二胺；Tris——三羟甲基氨基甲烷。