Human CD28 Valukine ELISA Kit

Human CD28 Valukine ELISA Kit

人 CD28 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL133
适用于定量检测天然和重组人 CD28 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

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I. 背景
分化簇(CD)抗原CD28是一种二硫键连接的44 kDa的同型二聚糖蛋白，在所有小鼠
T细胞和大多数人T细胞表面均有组成型表达(1-3)。CD28在结构上与活化T细胞中表达
的另一个分子CTLA-4密切相关，两者的铰链区是完全保守的。CD28和CTLA-4均由单
个Ig V样胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域组成(4-6)。编码这两个分子的基因与人
类2号染色体和小鼠1号染色体密切相关。CD28和CTLA-4及其配体B7-1和B7-2是调节T
和B细胞反应的主要共刺激途径之一。当B7-2与免疫突触内的抗原提呈细胞(APC)结合
时，CD28可促进T细胞的活化(7-9)。CD28/B7相互作用已被证明可以通过上调Bcl-xL
抑制活化T细胞的凋亡。CD28的结合也被证明可以调节Th1/Th2的分化(10, 11)。
CD28/B7共刺激途径方面已有大量研究报道。在疾病肌体内，CD28/B7介导的T细
胞共刺激有多种机制，包括活化的致病性T细胞的扩增、Th1/Th2细胞的分化以及T细胞
向靶组织的迁移(12)。阻断其作用可导致免疫抑制，对自身免疫性疾病、过敏、器官移
植和移植物抗宿主病的治疗具有重要意义。激活CD28/B7通路可能有助于免疫系统识别
和消除逃避免疫系统的肿瘤。

II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人CD28抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的人CD28会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗
人CD28检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过
氧化物酶（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显
色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。

B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人CD28，测定其回收率。回收率范围
在92.0-108.4%，平均回收率在101.0%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人CD28，测定其回收率。回收率范围在
84.6-101.8%，平均回收率在93.8%。
C. 灵敏度
人CD28的最低可测剂量（MDD）一般小于35.94 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的NS0表达的高纯度重组人 CD28蛋白（aa
19-152）所校正。

F. 样本预值
人血清样本 - 使用本试剂盒检测了5份人血清样本中人CD28的水平。所有样本的检测
值在259.6-393.6 pg/mL之间，平均值为335.8 pg/mL