Human VEGF Valukine ELISA Kit

Human VEGF Valukine ELISA Kit

人 VEGF ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL106
适用于定量检测天然和重组人血管内皮生长因子（VEGF）的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
血管内皮生长因子（VEGF或VEGF-A）又叫血管通透因子，是一种针对胎儿和成人
的血管新生和血管生成的有效调节因子（1-3）。血管内皮生长因子属于PDGF家族，该
家族蛋白的特点是在胱氨酸结和通过反向平行二硫键结合的二聚体的结构处，存在8个保
守的胱氨酸残基。经过选择性剪切和氨基酸的序列长度，人类表达不同的亚型，包括：
VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF183、VEGF189和VEGF206等等（4）。其中
VEGF165是表达量最高的一种亚型，其次是VEGF121和VEGF189（3, 4）。除了VEGF121，
其它的亚型都包含了基本的肝素结合区域且不能自由扩散（4）。人类的VEGF165与小鼠
和大鼠的相应的蛋白氨基酸序列同源性为88%。VEGF在各种细胞和组织中表达，包括骨
骼肌细胞和心肌细胞（5, 6）、肝细胞（7）、成骨细胞（8）、中性粒细胞（9）、巨噬
细胞（10）、角质形成细胞（11）、棕色脂肪细胞（12）、CD34+干细胞（13）、内皮
细胞（14）、成纤维细胞、血管平滑肌细胞等等（15）。VEGF的表达收到缺氧和细胞因
子的诱导，包括IL-1、IL-6、IL-8、抑瘤素M和肿瘤坏死因子等（3, 4, 9, 16）。在发育过
程和成体中，VEGF的表达量也是不同的（3）。
VEGF的二聚体与2个相关的酪氨酸激酶受体相结合，即VEGF R1（也叫Flt-1）和
VEGF R2（Flk-1/KDR）。VEGF同时可以诱导后者的同型二聚体和自磷酸化过程（3, 4, 7,
17, 18）。这些受体拥有7个胞外的免疫球蛋白的域和一个胞内分开的酪氨酸受体域。血
管内皮细胞和其它一些非内皮细胞都表达VEGF受体。尽管VEGF与VEGF R1的亲和力最
高，但VEGF R2 却是调控VEGF的血管生成的主要因子（3, 4）。VEGF165也结合臂板
蛋白（semaporin）受体，神经纤毛蛋白1（neuropilin-1），由此促进与VEGFR2的复合
体形成（19）。
VEGF因其参与血管生成而著称。在胚胎发育过程中，VEGF调控内皮细胞的增殖、
迁移和生存（3, 4），并由此调控血管的密度、体积；但对于血管形成的格局并不起作用。
VEGF通过成骨细胞和软骨细胞的招募促进骨骼的形成，它同时也是一个单核细胞趋化因
子（20-22）。在产后，VEGF维持血管内皮细胞的完整性，并且是大/小血管内皮细胞的
有效丝裂原。在成体中，VEGF主要在伤口修复和女性的生殖周期发挥作用（3）。在疾
病组织当中，VEGF促进血管的通透性。因此，VEGF通过外渗和肿瘤血管生成参与了肿
瘤的转移过程（23, 24）。针对阻断VEGF活性的各种治疗策略正在被用于控制由VEGF
诱导的肿瘤血管生成（25）。体内循环的VEGF水平与自身免疫性疾病（如类风湿关节炎、
多发性硬化症、系统性红斑狼疮等）的病症程度相关（26）。

A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人VEGF抗体包被于微孔板上，样品和标准品中
的人VEGF会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入辣根过氧化酶标记的抗
人VEGF抗体，与结合在微孔板上的人VEGF结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去；
加入TMB底物溶液（显色剂）。溶液颜色与结合目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标
仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本，人血清样本，人EDTA血浆样本和人枸橼酸钠血
浆样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

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III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板间分别检测20次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 128 401 810 129 388 749
标准差 8.24 26.0 40.2 12.0 31.1 70.2
CV% 6.4 6.5 5.0 9.3 8.0 9.4
B. 回收率
在不同类型样本中掺入检测范围内不同水平的人VEGF，测定其回收率。
样本类型 平均回收率（%） 范围（%）
细胞培养基 (n=4) 121 113 - 135
血清 (n=3) 124 116 - 127
血浆 (n=6) 100 78 - 119
C. 灵敏度
人VEGF的最低可测剂量（MDD）一般小于7.8 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的Sf-21昆虫细胞系表达的高纯度重组人VEGF蛋
白所校正。