Urinary TIM1/KIM1/HAVCR ELISA

Urinary TIM1/KIM1/HAVCR ELISA Kit

产品信息及操作手册
人尿液 TIM-1/KIM-1/HAVCR ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL210
适用于定量检测天然和重组人 T 细胞免疫球蛋白-粘蛋白（TIM-1）的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

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I. 背景
T 细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域 1（TIM-1），又称肾损伤分子 1（KIM-1）和甲型肝
炎病毒细胞受体 1（HAVcr1）是 TIM 家族的成员，参与先天性和适应性免疫反应的调
控（1, 2）。TIM-1 是一种 I 型跨膜蛋白，包含一个 N 端免疫球蛋白样结构域、一个具
有 O-和 N-连接糖基化的粘蛋白结构域、一个跨膜区段和一个胞质信号结构域（3, 4）。
由于多态性或替代剪接导致粘蛋白结构域缺失，可产生多种 TIM-1 变体（3）。其中一
些多态性与人类易患过敏症、自身免疫和严重甲型肝炎病毒感染有关（5）。在细胞外
结构域中，人 TIM-1 与小鼠和大鼠 TIM-1 有 41%的氨基酸序列相同。
在体内，TIM-1 在脾脏 B 细胞上表达，是识别 IL-10+调节性 B 细胞的标志物（6, 7）。
TIM-1 还在 CD4+ T 细胞、肥大细胞、半不变 NKT 细胞（iNKT）、树突状细胞、肾上
皮细胞和各种粘膜上皮细胞上表达（4, 8-15）。活化的 Th2 细胞、树突状细胞成熟后
以及肾小管上皮细胞损伤后，TIM-1 的表达都会上调（4, 9, 13, 14, 16, 17）。金属蛋白
酶介导的 TIM-1 在膜近端区域的裂解会导致 TIM-1 可溶形式的释放，这种形式的 TIM-1
可在尿液和血液循环中检测到（18, 19）。肾病患者的尿 TIM-1 高度升高，可能是肾损
伤的有用生物标志物（16, 20 - 25）。
据报道，TIM-1 是多种配体的受体，包括磷脂酰丝氨酸、白细胞单免疫球蛋白样受体 5
（LMIR5/CD300b），TIM-1（嗜同性），TIM-4，IgA 和多种包膜病毒的糖蛋白（5, 15,
26-33）。它与磷脂酰丝氨酸的相互作用使 TIM-1 能够介导对凋亡细胞的吞噬作用
（26-28）。在含有 TIM-1 的 iNKT 细胞中，与凋亡细胞的相互作用也会导致 iNKT 细胞
的活化、增殖和细胞因子的产生（11）。细胞表面或可溶性 TIM-1 与 LMIR5 之间的相
互作用被认为可诱导 LMIR5 介导的髓系细胞活化，包括巨噬细胞/单核细胞、肥大细胞、
中性粒细胞和树突状细胞（29）。这些相互作用有助于肾脏损伤过程中的组织稳态和损
伤（29）。配体诱导的 TIM-1 信号刺激 T 细胞活化并增强 Th2 细胞因子的产生（9, 31,
34）。在人体中，TIM-1 是甲型肝炎病毒、等多种病毒的细胞
进入受体（15, 33）。

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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人TIM-1抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的人TIM-1会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入辣根过氧化酶标记
的抗人TIM-1检测抗体进行孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色
剂）。溶液颜色与结合目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于人尿液样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测。
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

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III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板间分别检测40次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值（ng/mL） 0.98 3.04 5.88 1.09 3.19 6.23
标准差 0.042 0.119 0.259 0.069 0.193 0.484
CV% 4.3 3.9 4.4 6.3 6.1 7.8
B. 回收率
不同类型样本中掺入检测范围内不同水平的人TIM-1，测定其回收率。
样本类型 平均回收率（%） 范围（%）
人尿液样本（n=20） 104 94-112
C. 灵敏度
进行39次测试，人TIM-1的最小可检测剂量（MDD）范围为0.003-0.046 ng/mL。平均
MDD为0.009 ng/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
该免疫测定法以R&D Systems生产的高纯度的NS0表达的重组人TIM-1蛋白校正。

G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组人TIM-1蛋白。
将以下蛋白用标准品稀释液（1×）配制成100 ng/mL的浓度来检测交叉反应。将100
ng/mL的干扰蛋白掺入中间范围的重组人TIM-1对照品中，来检测干扰。没有观察到明
显的交叉反应或干扰。
Recombinant human： Recombinant mouse: Recombinant rat:
TIM-3 TIM-1 TIM-1
TIM-4 TIM-4

. 试剂盒组成及储存
A. 试剂盒组成
组成 描述 规格
Human TIM-1 Microplate 包被抗人TIM-1抗体的96孔聚苯乙烯板，8
孔× 12条 1块板
Human TIM-1 Conjugate 酶标检测抗人TIM-1抗体 1瓶
Human TIM-1 Standard 重组人TIM-1标准品（冻干），参考瓶身标
签进行重溶 1瓶
Assay Diluent RD1-82 检测液 1瓶
Calibrator Diluent Concentrate
(2×) / RD6Q 标准品稀释液用于稀释标准品和样品 1瓶
Wash Buffer Concentrate (25×) 浓缩洗涤缓冲液（25×） 1瓶
TMB Substrate TMB ELISA底物溶液/TMB底物溶液 2瓶
Stop Solution 终止液 1瓶
Plate Sealers 封板膜 3张