Human beta-NGF Valukine ELISA

Human beta-NGF Valukine ELISA Kit

适用于定量检测天然和重组人 β-NGF 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

I. 背景
NGF最初是在小鼠颌下腺中分离出来的一种7S复合物，由α、β和γ三个非共价连接
的亚基组成(1)。NGF的α亚基和γ亚基都是丝氨酸蛋白酶激肽释放酶家族的成员，而β亚
基，称为β-NGF或2.5S NGF，表现出了NGF的所有生物活性(2)。重组人β-NGF是两个
120氨基酸多肽组成的同型二聚体。人类β-NGF蛋白与小鼠和大鼠β-NGF在氨基酸水平
上的同源性约为90%，并表现出跨物种活性(3)。
NGF是一种特性良好的嗜神经蛋白，在周围神经系统交感神经和一些感觉神经元的
发育中起着重要作用(4)。此外，NGF还可以在中枢神经系统中作为基底前脑胆碱能神
经元的营养因子(5)。NGF也被证明对非神经元组织也有生物学效应(6)。NGF对因子依
赖性人红白血病细胞系TF-1起有丝分裂作用(7)。已发现NGF可增加新生大鼠肥大细胞
的数量，并诱导腹腔肥大细胞释放组胺(8)。NGF可促进组胺释放，并强烈调节嗜碱性
粒细胞对各种刺激的反应形成脂质介质(9)。NGF还可以诱导人B淋巴细胞的生长和分化，
抑制小鼠腹腔中性粒细胞的凋亡(10, 11)。综上所述，NGF是一种多效性细胞因子，除
了具有嗜神经活性外，还可能在免疫系统的调节中发挥重要作用(12, 13)。

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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人β-NGF抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的人β-NGF会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗
人β-NGF检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过
氧化物酶(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤未结合试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

B. 回收率
在细胞上清样本中掺入检测范围内不同水平的人β-NGF，测定其回收率。回收率范围在
90.6-108.3%，平均回收率在99.7%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人β-NGF，测定其回收率。回收率范围在
84.4-124.2%，平均回收率在98.6%。
C. 灵敏度
人β-NGF的最低可测剂量（MDD）一般小于0.162 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的NS0表达的高纯度重组人β-NGF蛋白所校正。