Human beta-NGF ELISA Kit

碧云天的Human β-NGF ELISA Kit (Human β-Nerve Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人神经生长因子β酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的β-NGF的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为23pg/ml，与人的BDNF、NT-3、CNTF、NT-4、CNTF、GDNF、MMP-1、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-12、MMP-13、TIMP-1、TIMP-4等均没有交叉反应，与小鼠β-NGF交叉反应性为32.4%，与大鼠β-NGF交叉反应性为2.7%。板内、板间变异系数均小于10%。
神经生长因子(Nerve Growth Factor, NGF)属于神经营养蛋白家族。通过与TrkA和p75^NTR受体相互作用发挥功能，是中枢神经系统和外周神经系统神经元发育和维持过程中的必需因子，在非神经元系统中也具有一定作用。NGF转录最初得到一个前体蛋白proNGF，在反面高尔基体网中经弗林蛋白酶加工处理得到成熟的NGF，也可分泌至细胞外在其它蛋白酶的作用下得到成熟的NGF。proNGF与NGF能够激活靶细胞不同的转录信号，因而具有不同的生物学功能。在大脑内，proNGF是NGF的主要存在形式。proNGF/NGF浓度平衡是维持正常生理功能的决定性因素，许多病理状态都与二者浓度失衡有关，例如在成年人脑内，proNGF浓度的升高往往与神经退行性病变的发生有关。
神经生长因子是由α、β、γ三亚基组成、分子量大约27kDa的蛋白复合物。其中β链大约具有118个氨基酸，是保证NGF生物活性的主要组成部分。当β-NGF与相应受体TrkA结合后主要会导致三条信号通路的激活：PI3K/Akt、Ras/Raf/ERK和PLC/PKC。这些信号通路的激活对神经系统的发展、形成和维持具有重要意义，同时对于情绪稳定也具有一定影响。由于β-NGF的产生会受到睾酮的影响，因而女性发生情感障碍的比率通常比男性高出1.6-2.2倍。另外，已有研究表明，β-NGF在免疫调节中也具有重要作用，IL-1、TNF-α、PDGF和TGF-β等细胞因子能够刺激星形胶质细胞分泌更多的NGF；NGF也可刺激人B淋巴细胞的生长和分化。人β-NGF与小鼠和大鼠β-NGF具有90%的氨基酸同源性。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人β-NGF的浓度，其原理见图1。人β-NGF特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人β-NGF会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人β-NGF抗体后，生物素化抗人β-NGF抗体与人β-NGF结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人β-NGF浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人β-NGF浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

产品编号	产品名称	包装
PN768-1	人β-NGF抗体预包被板	8孔×12条
PN768-2	样品分析缓冲液	5ml
PN768-3	标准品稀释液	10ml
PN768-4	人β-NGF标准品	4-8瓶
PN768-5	人β-NGF生物素化抗体(100X)	110μl
PN768-6	人β-NGF生物素化抗体稀释液	10ml
PN768-7	辣根过氧化物酶标记Streptavidin	10ml
PN768-8	洗涤液(20X)	30ml
PN768-9	TMB溶液	10ml
PN768-10	终止液	5ml
PN768-11	封板膜(透明)	2张
PN768-12	封板膜(白色)	2张
-	说明书	1份

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组份4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。