Human IL-17 Valukine ELISA Kit

Human IL-17 Valukine ELISA Kit

适用于定量检测天然和重组人 IL-17 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

I. 背景
人白细胞介素17 (IL-17)，也被称为IL-17A和CTLA-8，是一种15-20 kDa、多种糖
基化的多肽，属于IL-17家族的细胞因子 (1-5)。人IL-17/17A被合成为155个氨基酸(aa)
的前体，包含23个aa的信号序列和133个aa的成熟区，该区域包含一个半胱氨酸-结折
叠 (4-6)。在人类和小鼠中，都有一个保守的N-糖基化位点，该位点可能贡献了5 kDa 的
天然分子量。IL-17A与IL-17F形成32-38 kDa 二硫键连接的同型二聚体和40-45 kDa 共
价异二聚体 (7- 9)。分泌最多的IL-17A以IL-17A: F异二聚体的形式存在，而IL-17A: A
同型二聚体是这两种形式中最具生物活性的 (8)。成熟的人类IL-17A与小鼠、猪和黑猩
猩IL-17A分别有61%、74%和99%的aa相同 (10-12)。已知的哺乳动物能产生IL-17的细
胞有：CD4 + T细胞Th17， Paneth细胞，GR1+CD11b+骨髓抑制细胞，CD27-γδT细
胞，CD1+ NK1.1-iNKT细胞，CD3-CD4+LTi-like细胞 (9, 13-17)。
据报道，人类IL-17 的高亲和力受体，似乎是IL-17RA和IL-17RC的异源多聚体，其
比例可能为2:1 (1, 18)。IL-17RA是一种130 kDa的I型跨膜糖蛋白，与细胞因子、TNF
或免疫球蛋白受体超家族成员无相似之处 (2, 10, 15)。IL-17RC也是一种I型跨膜蛋白，
其大小约为90-95 kDa，与IL-17RA的aa同源性不足30% (19, 20)。IL-17A和IL-17A: F
的活性都需要这两种受体。在配体与IL-17RA结合后，这两个受体似乎形成了一种功能
联系 (1, 21, 22)。
IL-17以参与中性粒细胞的募集和存活而闻名 (14, 15, 23, 24, 25)。其诱导最初被描
述为抗原刺激树突状细胞的结果，导致IL-23的分泌。在与T细胞受体无关的事件中，IL-23
诱导T细胞产生IL-17 (14)。一旦分泌，骨髓中的IL-17似乎会诱导基质/成纤维细胞表达
G-CSF和干细胞因子(膜形式)，从而增加多形核中性粒细胞(PMN)的分化和产生。IL-17
可能通过直接阻断中性粒细胞凋亡，促进更大的PMN循环来补充这一机制(23)。在组织
中，IL-17似乎也会主要通过对巨噬细胞和内皮细胞 (EC) 的作用而促进中性粒细胞外
渗，。在巨噬细胞中，IL-17诱发TNF-α、IL-1β和IL- 6产生 (26)。TNF-α和IL-1β作用于
ECs诱导局部G-CSF分泌，而IL-17会增强此作用 (27)。IL-17通过诱导EC CXC趋化因
子释放和NO的产生进一步促进PMN流入，从而增加血管通透性 (14, 28)。IL-17的作用
并不局限于炎症反映。在滑膜关节中，IL-17可以在成骨细胞中增强RANKL的表达。这
为破骨细胞的形成和随后的骨吸收提供了刺激 (24)。IL-17A与IL-4和CD40L共同促进
IgE分泌细胞的生成 (29)。而在白色脂肪中，IL-17A抑制脂肪细胞从前脂肪细胞分化，
阻碍成熟脂肪细胞对葡萄糖的摄取 (30)

II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-17捕获抗体包被于微孔板上，经过孵育，
样品和标准品中的IL-17会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生
物素化的抗人IL-17检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标
记的辣根过氧化物酶(streptavidin-HRP) 孵育。洗涤后，加入TMB底物溶液，避光显色。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。

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III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。
细胞培养上清/血清
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值（pg/mL） 24.0 102.9 378.4 25.4 103.7 383.1
标准差 1.1 3.0 6.6 1.1 3.3 20.2
CV% 4.5 2.9 1.7 4.3 3.2 5.3
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人 IL-17，测定其回收率。回收率范围
在 93.4-100.4%，平均回收率在 98.0%。
在血清样本中掺入检测范围内不同水平的人 IL-17，测定其回收率。回收率范围在
85.4-91.5%，平均回收率在 89.5%。

C. 灵敏度
人 IL-17 的最低可测剂量（MDD）一般小于 2.93 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相
对应浓度。
D. 校正
此 ELISA 试剂盒经由 R&D Systems®生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人 IL-17 蛋白所
校正。