Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒*红色荧光*

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光

产品简介
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒采用Z-DEVD-ProRed™作为Caspase 3活性的荧光指示剂：当Caspase 3酶切ProRed™标记的DEVD封闭肽段后，会释放出强红色荧光基团ProRed™，其荧光信号在~530 nm激发光下，于~620 nm发射波长处进行检测。试剂盒提供所有必需组分及经过优化的检测方案，检测结果稳定可靠，并可轻松适配高通量筛选：96孔板规格：每孔100 μL试剂，可完成100次检测；384孔板规格：每孔25 μL试剂，可完成400次检测

操作步骤

1.准备细胞：

1.1 对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中以20,000个细胞/孔/ 90 uL接种96孔，或以5,000个细胞/孔/ 20 uL接种384孔，过夜培养。

1.2 对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀以80,000至200,000个细胞/孔/ 90 uL悬浮在培养基中，用于96孔；或20,000至50,000个细胞/孔/ 20 uL用于384个细胞。 实验前，将板以800 rpm的速度离心2分钟。

注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的佳细胞密度。

2.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

3.将细胞板在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为3-4小时）以诱导凋亡。

4.加入Caspase 3/7底物工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板。）

5.在避光的条件下，在室温下孵育平板至少1小时。

注意：如果需要，在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟，向选定的样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂，以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。

6.使用荧光酶标仪（Ex / Em = 540/620 nm（截止= 610 nm））监控荧光强度。

注意：有时，底部读取可提供更好的信噪比。如果使用底部读取模式，则以800 rpm的速度离心细胞板（特别是悬浮细胞）2分钟（制动）。

图示

图1. Jurkat细胞中Caspase 3/7活性的检测。 当天，将Jurkat细胞以200,000个细胞/ 90 µL /孔的密度接种在Costar黑色96孔板中。 用或不用1 µM星形孢菌素处理细胞5小时。 加入半胱天冬酶3/7工作溶液（100 µL /孔）并在室温下孵育1小时。 使用FlexStation荧光酶标仪（Molecular Devices）在Ex / Em = 540/620 nm（截止= 610 nm）下测量荧光强度。