Cy5 酪胺

Cy5 酪胺基本信息

产品名称：Cy5 酪胺（Cy5 tyramide）

产品货号：11066

产品规格：1 mg

品    牌：AAT Bioquest

储存条件 :在零下15度以下保存, 避免光照

 

Cy5 酪胺优势

1.（TSA）是一种强大的酶扩增技术，比传统的酶促扩增程序具有更高的检测灵敏度.

2.TSA方法的灵敏度增强允许增加抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱标记。

 3.Cy5酪胺含有明亮的Cy5，可以使用标准的Cy5过滤器套件轻松检测到。

 

Cy5 酪胺适用范围:

Cy5 酪胺（Cy5 tyramide）是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品，用于荧光信号放大的产品，它通过HRP和过氧化氢催化，标记到抗体上。Cy5 酪胺（Cy5 tyramide）适合标记抗体或蛋白。应用于细胞或组织。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的Cy5 酪胺（Cy5 tyramide）.

 

Cy5 酪胺适用仪器：

荧光显微镜  

Ex:     Cy5滤波片组

Em： Cy5滤波片组

推荐孔板:黑色透明底板

滤波片：Cy5滤波片组

 

Cy5 酪胺注意事项：

该产品不能进行活体成像。

 

Cy5 酪胺实验方案

样品染色示例

概述

1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟

操作步骤

   在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C，避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。

1.制备储存溶液

Tyramide原液（1000X）加入适量的DMSO，制成1-5mM的酪酰胺储备液。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存
2.制备工作溶液

Tyramide工作溶液（1X）：
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003％H2O2的缓冲液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4时可用于获得佳性能。
注意：Tyramide工作溶液应立即使用。

3.细胞固定和透化

3.1在室温下用PBS中的3.7％甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意：组织固定，脱蜡和再水化，根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。
4.过氧化物酶标记

4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，在室温下用PBS冲洗两次。 
4.2可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白，建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次，每次5分钟。
5.酪酰胺标记

5.1为每个样品准备并应用100μL酪酰胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短酪酰胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪酰胺。
5.2用PBS冲洗三次。
6.荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪酰胺标签的信号。