荧光法谷胱甘肽检测试剂盒 *红色荧光*

Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒 红色荧光

货号	10055	存储条件	f/l
规格	200 Tests
Ex (nm)	510	Em (nm)	524
分子量		溶剂

适用范围

用于检测谷胱甘肽

 

产品介绍

生物样本中还原型与氧化型谷胱甘肽（GSH）的监测对于评估细胞和组织的氧化还原状态及解毒功能至关重要，这直接关系到谷胱甘肽在抵抗氧化应激和自由基介导的细胞损伤中的保护作用。半胱氨酸代谢异常主要包括两种疾病：由溶酶体转运缺陷引起的常染色体隐性遗传病胱氨酸贮积症，以及常见的氨基酸转运遗传性疾病胱氨酸尿症。作为蛋白质组成氨基酸中的特殊成员，半胱氨酸具有独特的生物学特性。目前市场上可用于生物体系硫醇定量检测的试剂或试剂盒选择有限，且现有商业化产品普遍存在灵敏度不足或操作流程繁琐等问题。

Amplite®荧光法谷胱甘肽定量检测试剂盒提供了超灵敏的GSH检测解决方案，采用专利非荧光染料技术，该染料与硫醇类物质特异性结合后可产生强荧光信号，通过灵敏的单步荧光检测法，能在100 µL反应体系中检测低至1pmol（10⁻¹²mol）的半胱氨酸或谷胱甘肽（GSH）；该检测方案支持96孔或384孔微孔板操作模式，无需分离步骤即可直接适配自动化检测系统，检测结果可通过荧光酶标仪快速读取。

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

 

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10至60分钟
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（截止= 515 nm）

 

溶液制备

1.储备溶液

1.1 GSH标准溶液（1 mM）：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液。

1.2 Thiolite Green原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备100X Thiolite Green原液。

 

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

将30μL的1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液加入到970μL的测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol /μL）GSH标准溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到用分析缓冲液（组分B）连续稀释的GSH标准品（SD7-SD1）。 注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

 

3.工作溶液

将50μL100XThiolite Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1 - SD7,0.01至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释液（0.01至10μM）
BL	50ul	分析缓冲液
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备GSH标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。

2.在GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGSH工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGSH工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下监测荧光增加。