细胞增殖与细胞生长曲线实验(CCK 8/MTT/Am Blu

细胞增殖及细胞毒性相关检测服务
细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老和死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。
细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8，MTT等 方法。其中测定细胞生长曲线是检测细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂 的悬浮然后贴壁，随后经过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。为了准确描述整个 过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。以存活细胞数(万／mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。生博公司目前主要使用MTT、CCK8和Am-blue三种试剂测定细胞生长曲线。
细胞增殖及细胞生长曲线实验

MTT检测
MTT检测以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT是一种黄颜色的染料，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比，从而可以对细胞的活力、增殖与凋亡情况进行检测。

CCK8检测
CCK-8的原理跟MTT是相同的，不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤，因此可以减少一定的误差，其重复性优于MTT；且对细胞毒性小。


Am-Blue方法检测
Am-Blue检测试剂的主要成分是一种氧化还原指示剂。其在氧化状态下呈现紫蓝色无荧光性，在细胞增殖过程中，细胞内NADPH/NADP、 FADH/FAD、 FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，处于还原环境。在还原状态下，Am-blue转变为呈粉红或红色荧光的还原产物，其吸收峰为530-560nm，而散射峰为590nm。最后用荧光酶标仪进行检测，吸光度和荧光强度与活性细胞数成正比。Am-blue为水溶性试剂，无需固定、裂解细胞，只需一步操作即可测定，使高通量筛选更高效。不影响细胞代谢、细胞因子的分泌和抗体的产生，细胞仍可进行后续实验。
上海生博提供：根据客户要求对指定细胞进行培养并进行实验处理（如药物处理，病毒感染等），利用MTT /CCK8/AmBlue检测对细胞增殖情况及生长曲线进行数据的收集和分析。

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