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- 2025年07月15日
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- 保质期：
1年
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10000
- 供应商：
上海信裕
- 保存条件：
室温保存
产品包装：试剂盒组成 D1800-50 D1800-100 储存条件
RNase A 1ml 2ml -20℃
蛋白酶K 1ml 2ml -20℃红细胞裂解液 120ml 120ml×2 RT
溶液A 15ml 2 5ml RT溶液B 15ml 25ml RT拭子病毒保存液
漂洗液 15ml 15ml×2 RT洗脱液 15ml 30ml RT
吸附柱 50个 100个 RT收集管 50个 100个 RT说明书 1份 1份 RT
注意事项：
1、本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制备大分子量血液基因组DNA，可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时，有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物的全血如人全血中的红细胞无核，故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞，以免影响拭子病毒保存液 白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量减少为5-20ul，不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的 pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
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文献和实验首次扩增的病毒保存液，加入DMEM5%至1ml，混匀，这样稀释得到的MOI 值约为5。 3 移去培养液，小心加入病毒混合液，切勿破坏细胞单层，十字形慢慢晃动3 次，37℃ CO2 孵箱中培养90 分钟。 4 加入9ml DMEM5%。 5 再培养72 小时，这时在10ml 溶液中大约有5×109 ～5×1010 个病毒颗粒，进行MOI 测定以估计病毒颗粒。 注：如果此时得到的病毒量已足够，可立即进行病毒滴度测定。收集细胞，600×g 离心5 分钟沉淀细胞，去上清后加入最小
上清或细胞沉淀）。为优化时间进程，每个感染周期必须与下一次细胞扩增培养同步。如果由于各种原因不能同步，则必须将病毒冻存，直至下一次细胞培养开始后再融化病毒。注意每次扩增都将会剩下一些病毒，这些病毒先不必丢弃，以便下一步扩增失败时备用。每次扩增最好都用最低代的病毒颗粒，这样产生突变型病毒的可能性会大大降低。 操作步骤： 1 在100mm 培养皿或75cm2 培养瓶中加入10ml DMEM5%培养5×106 293 细胞。 2 取0.5ul 首次扩增的病毒保存液，加入DMEM5%至1ml，混匀
，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米cm2) 计算。 （3）细菌菌落总数检查： 1ml采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放35℃温箱内培养24~48 h计数菌落。 手细菌菌落总数（cfu/ cm2）= 平板上菌落数×采样液稀释倍数30×2 （4） 判断标准： 见表6-3-1。 2． 物体表面的微生物学监测 （1）采样时间：消毒处理后4 h内采样。 （2）采样面积： 被采表面 （3）采样方法： 用5cm
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