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- 技术资料
- 保质期:
1年
- 库存:
10000
- 供应商:
上海信裕
- 保存条件:
室温保存
产品包装:试剂盒组成 D1800-50 D1800-100 储存条件
RNase A 1ml 2ml -20℃
蛋白酶K 1ml 2ml -20℃红细胞裂解液 120ml 120ml×2 RT
溶液A 15ml 2 5ml RT溶液B 15ml 25ml RT高GC DNA清除剂
漂洗液 15ml 15ml×2 RT洗脱液 15ml 30ml RT
吸附柱 50个 100个 RT收集管 50个 100个 RT说明书 1份 1份 RT
注意事项:
1、本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物高GC DNA清除剂 的全血如人全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20ul,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的 pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率。
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文献和实验PCR条件的优化是一个麻烦耗时的过程,涉及到温度、时间、镁离子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多个因素的调整。一般来说利用热启动,比如Platinum Taq DNA聚合酶(Invitrogen)可以达到更高的特异性,降低对镁离子浓度的依赖,并且有利于提高“问题模板”的产量。然而,传统的PCR条件优化策略经常对含有稳定二级结构的DNA序列无效,因为这些序列难以变性,并且在退火过程中影响引物与模板的结合,还可能影响到DNA聚合酶的延伸。 作为一种新的PCR添加
xjktony 扩增模板的GC 含量为66%,也不算很高,我做过更高的GC 含量(80%)的PCR.对于这种高GC含量的PCR,要加些DMSO等,以解除其二级结构的影响,当然现在也有专门这种PCR Buffer卖. vanny 宝生物有这种做高GC含量的酶和buffer,称为LA TAKARA酶,里面有GC buffer,效果还不错。 westernblot 你用DMSO5%加到里面,60%应该不是算高的,如果实在不行,就用advantage 2 high GC
含量基因的PCR引物设计及扩增问题 【求助】高GC细菌DNA序列测序受阻 【求助】高GC含量的PCR 【求助】RT-PCR高GC含量片断的引物设计 【求助】高GC含量测序的问题 【求助】高GC测序 【求助】高GC含量长片段的PCR 【求助】请问高GC含量模板的PCR有何良策? 【求助】请问各位同道XDJM高GC含量片断的基因pcr怎么做? 【求助】高GC含量pcr确实片段 【求助】急,急,急,高GC含量PCR 【求助】高GC,tm相差大的两引物pcr 【求助】高GC含量模板
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