质粒小量提取试剂盒 MolPure® Plasmid Min

产品信息

产品名称	产品货号	规格	价格（元）
MolPure® Plasmid Mini Kit 质粒小量提取试剂盒	19001ES08	5T	询价
	19001ES50	50T	183.00
	19001ES70	200T	573.00

 

产品描述

MolPure^® Plasmid Mini Kit 采用 MolPure^® DNA Column P3 和新型的溶液体系，使用常规碱裂解法分离质粒 DNA。提取过程中不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀。试剂盒内的 MolPure^® DNA Column P3 可 特异性吸附质粒 DNA，不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质，具有高效、快速、方便等特点。提取到的质粒 DNA 纯度高， 可直接用于后续酶切、转化、测序等实验。

 

试剂盒组分

类别	编号	组分名称	19001ES08 (5 T)	19001ES50 (50 T)	19001ES70 (200 T)
Part I	19001-A	RNase A (10 mg/mL)	15 µL	125 µL	500 µL
Part II	19001-B	缓冲液 RS* (RS Buffer P3*)	1.5 mL	12.5 mL	50 mL
	19001-C	缓冲液 AC (AC Buffer P3)	500 µL	5 mL	20 mL
	19001-D	DNA 吸附柱 P3 (MolPure® DNA Column P3)	5 个	50 个	200 个
	19001-E	2 mL 收集管 (2 mL Collection Tube P3)	5 个	50 个	200 个
	19001-F	裂解液 LB (LB Buffer P3)	1.5 mL	12.5 mL	50 mL
	19001-G	结合液 BD (BD Buffer P3)	1.8 mL	17.5 mL	70 mL
	19001-H	去蛋白液 PL* (PL Buffer P3* )	1.6 mL	16 mL	63 mL
	19001-I	漂洗液 W* (Wash Buffer*)	1.3 mL	13 mL	50 mL
	19001-J	洗脱液 (Elution Buffer)	1 mL	10 mL	20 mL

 

运输和保存方法

 Part I 组分冰袋运输，-20℃保存；Part II 组分常温运输，室温保存。产品有效期 12 个月。

 

注意事项

避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可 37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

本产品仅作科研用途！

 

实验前准备

自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，无水乙醇，离心管等。

除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到 13,000 rpm 转速的传统台式离心机。

首次使用前，将 RNase A (10 mg/mL) （19001-A）加入缓冲液 RS*（19001-B）瓶中，充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后置于 4℃保存。若长期不用，置于-20℃保存。

首次使用前，须在漂洗液 W*（19001-I）瓶和去蛋白液 PL*（19001-H）中加入指定量的无水乙醇（规格：5T加1mL，50T

加10mL，200T加40mL），充分混匀后使用，并做好标记。

 

操作方法

一、样本预处理：

取 1.5-4.5 mL 过夜培养的菌液，12,000 rpm 离心 30 s，弃掉上清液，收集菌体。

【注】：对于低拷贝质粒或＞10 kb 的质粒，建议适当加大菌体量，并等比例增加缓冲液 RS*、裂解液 LB 及结合液 BD 用量。

加入 250 µL 缓冲液 RS*，吹打或涡旋重悬菌体沉淀。

【注】：确保菌体彻底重悬。

【注】：确保缓冲液 RS*中已添加 RNase A。

加入 250 µL 裂解液 LB，温和上下翻转 6-8 次以充分裂解菌体，室温放置 4 min。

【注】：此步骤不宜超过 5 min。

【注】：菌体裂解应温和进行，避免造成基因组 DNA 剪切断裂。

【注】：裂解后的菌液应清亮粘稠。若出现浑浊，可能为菌体裂解不彻底，可考虑减少菌体使用量。

加入 350 µL 结合液 BD，立即温和上下翻转 6-8 次充分混匀。室温放置 2 min。13,000 rpm 离心 10 min，小心收集上清。

【注】：加入结合液 BD 后立即混匀，以免出现局部沉淀。

二、质粒 DNA 提取：

向 DNA 吸附柱P3 中加入 100 µL 缓冲液 AC，13,000 rpm 离心 1 min，弃掉废液。

【注】：处理后的 DNA 吸附柱 P3 仅限当天使用。

将 DNA 吸附柱P3 套入 2 mL 收集管中，备用。

将上述上清液加入到 DNA 吸附柱 P3 中，12,000 rpm 离心 1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积 700 µL，可分多次离心。

4.（选做） 加入 500 µL 去蛋白液 PL*，12,000 rpm 离心 1 min，弃废液。

【注】：确保去蛋白液PL*已添加无水乙醇。

【注】：此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质。

将 DNA 吸附柱P3 放回收集管，加入 600 µL 漂洗液 W*，12,000 rpm 室温离心 30 s，弃废液。

【注】：确保漂洗液 W*已添加无水乙醇。

重复一遍步骤 5。

将 DNA 吸附柱P3 放回收集管，空柱 13,000 rpm 室温离心 2 min，以除去残留的漂洗液 W*。

将 DNA 吸附柱P3 放入新的 1.5 mL 离心管中（自备），在DNA 吸附柱P3 中央加入 50-100 µL 洗脱液，室温放置 2 min。然后 12,000 rpm 离心 1 min。收集滤液，即为质粒DNA 溶液。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①70℃预热洗脱液；②将 DNA 滤液再次上柱，室温放置 2 min 后，洗脱。

质粒 DNA 溶液可置于-20℃长期保存。

HB220117