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- 抑制性消减杂交（SSH）技术
- 上海
- 2025年07月12日
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抑制性消减杂交（SSH）技术
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生工生物工程
抑制性消减杂交（SSH）技术
7-1原理
抑制性消减杂交（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）是利用PCR反应链内退火优先于链间退火的特点和分子杂交二级动力学原理，经过体系不断优化建立起来的快捷、有效地 差异基因筛选方法，具有低丰度mRNA富集效率高、假阳性低、灵敏度高、重复性好等特点。现已广泛应用于动植物发育和分化、疾病易感性差异、抗药性差异和 组织（病理和正常样本）差异及微生物基因分型差异的研究。
7-2 实验流程
7-3 价格及服务周期
35,000元，45个工作日。
7-4 服务说明
1. 客户提供
样本：组织2~4 g、细胞108、总RNA纯化后>200 µg或mRNA 纯化后>2 µg。
2. 最终交付
SSH差减文库（PCR产物）、逆向斑点杂交筛选到的差异表达基因的克隆（包括构建于T载体的差异文库（涂布后的平板）、序列信息（如客户要求测序））及一份书面实验报告。
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文献和实验PCR加以验证。抑制性消减杂交文库技术 是一种革命性的差异表达基因筛选技术。该方法结合了抑制性PCR和消减杂交技术，即御用PCR反应链内退火有限于链间退火的特点和分子杂交二级动力学原理，经过体系不断优化建立起来的快捷、有效的差异基因筛选方法。与传统的DD—PCR、SAGE及cDNA—RNA等技术相比，具有低丰度mRNA富集效率高、假阳性低、灵敏度高重复性好等特点。现已广泛应用于动植物发育和分化、疾病易感性差异、抗药性差异和组织（病理和正常样本）差异及微生物基因分型差异的研究。技术方法成熟有效不需
一、cDNA第一链的合成1、在0.5ml经DEPC处理过的离心管中分别加入tester和driver的mtRNA各2ug，然后加入1ul（10uM） 随机引物（9mer），70℃温浴2min，然后迅速置于冰上放置2min，然后在每管中加入如下混合物：5×First-strand Buffer2uldNTPs Mix（10mM）1ulsterile H2O1ulAMV Reverse Transcriptase（20U/ul）1ul2、42℃反应1.5hr，然后将离心管置于冰上，终止cDNA第一
无论是从一个胚胎细胞分化为不同的组织器官，或者是从正常的组织突变为肿瘤组织，都可能涉及在同一基因组 背景下不同基因的差异性表达。寻找差异表达的基因就有可能揭示细胞分化的机制或者肿瘤的成因，因而也就成为一项热门的技术。寻找差异表达的基因有不少方法，抑制消减杂交（SSH）是比较有效的一种方法。以Clontech的PCR-Select cDNA Subtraction Kit为例：将样品（tester）和对照（driver）的mRNA分别反转录并合成为双链cDNA后进行酶消化；样品（tester
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