FITC 标记羊抗人 IgG (H+L)

荧光素FITC标记抗体的方法

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → FITC-NS-C-N-H2-蛋白质常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体，也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark

FITC标记抗体-Marsshall氏法

浓度为20mg/ml，缓冲液容量为总量的1/10，混匀，将三角烧瓶置冰槽中，电磁搅拌速度适当，即以不起泡沫为宜搅拌5—10min；       2. 荧光素的准备。根据欲标记的蛋白质总量，按每毫克蛋白加0.01mg荧光素的比例，用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末；       3. 结合（或称标记）。将称取的荧光色素缓慢加入到球蛋白溶液中，并不停地搅拌，避免将荧光素粘于三角烧瓶壁或搅拌玻璃棒上，在大约5—10min内加完。然后继续搅拌12—18h。因荧光素与球蛋白结合期间要求必须

FITC标记抗体-改良法

ml三蒸水中即成；       方法与步骤：       根据Marshall氏法高效价的抗人球蛋白兔免疫血清，分离球蛋白。       1. 用0.15 mol/L NaCl的盐水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3缓冲液稀释使每毫升内含抗体10mg，缓冲液为总量的10%；       2. 将以上溶液降温至4℃，按蛋白：荧光素=50—80mg：1mg的比例加入异硫氰酸荧光素，在0—4℃下电磁搅拌12—14h；       3.用半饱和硫酸铵将标记球蛋白