FITC标记-山羊抗人IgG(H+L)

荧光素FITC标记抗体的方法

min。②荧光素的准备 根据欲标记的蛋白质总量，按每毫克免疫球蛋白加0．01mg荧光色素，用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。也可用下述公式计算出免疫球蛋白、荧光素的量，还可以算出需加缓冲液的量。a．蛋白溶液：含量Amg／m1；容积Bml。b．总蛋白量(AXB)＝Crag。c．C／20～C／10＝Dmg(如蛋白含量低于20mg／ml，用C／10；如高于20mg／ml，用C／20)。d．荧光素FITC的量：(1／50～2／100)XC＝Emg。e．巳0．5mol／L(pH9．5)碳酸盐缓冲

FITC标记抗体-Marsshall氏法

浓度为20mg/ml，缓冲液容量为总量的1/10，混匀，将三角烧瓶置冰槽中，电磁搅拌速度适当，即以不起泡沫为宜搅拌5—10min；       2. 荧光素的准备。根据欲标记的蛋白质总量，按每毫克蛋白加0.01mg荧光素的比例，用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末；       3. 结合（或称标记）。将称取的荧光色素缓慢加入到球蛋白溶液中，并不停地搅拌，避免将荧光素粘于三角烧瓶壁或搅拌玻璃棒上，在大约5—10min内加完。然后继续搅拌12—18h。因荧光素与球蛋白结合期间要求必须

FITC标记抗体-改良法

ml三蒸水中即成；       方法与步骤：       根据Marshall氏法高效价的抗人球蛋白兔免疫血清，分离球蛋白。       1. 用0.15 mol/L NaCl的盐水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3缓冲液稀释使每毫升内含抗体10mg，缓冲液为总量的10%；       2. 将以上溶液降温至4℃，按蛋白：荧光素=50—80mg：1mg的比例加入异硫氰酸荧光素，在0—4℃下电磁搅拌12—14h；       3.用半饱和硫酸铵将标记球蛋白