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- TUNEL 细胞凋亡原位系列检测
- 江苏南京
- 2025年12月09日
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- 技术资料
- 服务名称：
TUNEL 细胞凋亡原位系列检测
- 提供商：
凯基生物
| TUNEL 细胞凋亡原位系列检测 | |
| 实验目的：缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡 实验原理：本实验可检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况，其原理是不同标记（荧光或者生物素）的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘－OH末端，再通过荧光激发或者化学显色的方法，特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。本实验适用于组织和细胞样本的凋亡原位检测。 实验仪器：低温高速离心机、光学或荧光显微镜、恒温孵育箱等 实验内容与方法： 一、样品处理 1、细胞样品：自然晾干的细胞样品固定；封闭；通透液促渗 2、冰冻样本：PBS浸润；封闭；通透液促渗 3、石蜡样品：脱蜡及水化；微波或蛋白酶K修复；封闭 二、标记反应 1、荧光标记：滴加TdT酶反应液，反应；荧光显微镜检测 2、生物素标记：滴加TdT酶工作液反应；滴加Streptavidin-HRP工作液反应； DAB显色；苏木素复染；显微镜观察拍照 客户提供实验信息： 1、实验信息（客户提供）： 样品信息 （全称、来源、种属等） 2、实验材料提供 （1）样本材料： ² 冰冻组织样品需超低温保存 ² 贴壁细胞必须爬片，本市可以上门取样后我们来固定，外地必须固定后再送样。悬浮细胞可充液或涂片固定好以后寄送 ² 石蜡包埋组织可包埋后或固定好以后寄送 （2）试剂： 采用凯基生物自产TUNEL系列凋亡检测试剂盒等。或可按客户要求代订和使用其它品牌公司试剂。 服务周期：2周至5周（具体视样品数而定） 结果提交：提交实验报告书（包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析）、原始数据、图片，文本或电子版。 实验范例 : 经饥饿处理小鼠空肠 小鼠肝损伤模型的肝组织 |
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文献和实验的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡，其中 TUNEL 法做的最多，我购买的试剂盒主要是 roche、 promega 公司，结果大多数成功，偶尔也有失败，下面我把实验中的关键问题与大家共享一下，同时也希望能对初学者有所帮忙。 TUNEL 法的实验原理 基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内，在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合，再用 HRP 标记的链霉
ziweihua 求助高人啊，我想用斑马鱼整体胚胎检测其细胞凋亡情况，选用的Roche的in situ cell death detection kit, POD. 按照其中的贴壁细胞或细胞涂片的方法做了两遍，可是连阳性对照都没有信号。后来查找到一篇论文中的方法，如下： a，收集胚胎后用PBS清洗，转移到1.5ml的EP管内，4%多聚甲醛PBS固定过 夜 b，用PBS配制 25%50%75%的梯度酒精，每次5min将胚胎梯度脱水。
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