- ￥5453
- roche
- 罗氏 11047841001
- 2025年11月13日
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- 详细信息
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- 英文名：
Trypsin, Sequencing Grade
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- 供应商：
嵘崴达
- 保存条件：
2-8°C
- 规格：
4 X 100 μG
胰蛋白酶，测序级
from bovine pancreas
别名:
trypsin
一般描述
测序级胰蛋白酶从牛胰腺中分离而得，可作为一种高度纯化且特异性的蛋白酶。测序级胰蛋白酶是一种丝氨酸内肽酶。 它可在碱性氨基酸Arg和Lys的羧基侧对肽键进行特异性的断裂。Arg和Lys的酰胺和酯键也被切割。
特异性
测序级胰蛋白酶的参数是通过氧化的胰岛素B-链 （胰岛素Box）作为底物而被确认的。高浓度的测序级胰蛋白酶（1份重量的酶及18份重要的胰岛素Box）孵育18小时后以检测胰凝乳蛋白酶杂质的存在。
参数（HPC，与胰岛素Box）：
1小时后断裂：≥90%;
18小时后非特异性断裂：≤10%;
应用
测序级胰蛋白酶可用于消化溶液中、凝胶中或印迹膜上的蛋白。
该酶可用于蛋白质结构分析、胰蛋白酶比对、指纹分析、序列分析和易位研究。 测序级胰蛋白酶可从纯化的糖蛋白上生成糖肽并适合于消化聚丙xi酰胺凝胶中的蛋白。
质量
纯度：不含在反相HPLC中可能干扰肽分离的杂质。
制备说明
稳定剂：胰蛋白酶在4 M是稳定的。
工作浓度：蛋白重要的1/100至1/20（溶液中）；1-5 μg/100 μl （用于胶内消化）
储存条件（工作溶液）：在0.01% (v/v)三氟yi酸或1 mM HCl中的溶液，如果储存在2到8°C，可最多使用一周。在中性至微碱性pH值的溶液中蛋白的孵育可能会发生部分的自溶。对于此应用，Roche推荐测序级的改良胰蛋白酶。
| 11047841001 | Trypsin, Sequencing Grade胰蛋白酶，测序级 | 4 x 100 µg |
| 11464752001 | Phosphatase, alkaline (AP), ac 碱性磷酸酶 | 10 mg (approx. 40 mg lyo.) |
| 4727878001 | G418 Solution, 20 mL G418溶液 | 20 ml (equivalent to 1 g) |
| 11097113001 | Collagenase/Dispase, 500mg, no胶原酶/中性蛋白酶 | 500 mg |
| 11363735001 | HFCS Supplement (50 x) | 10 ml (50x) |
| 11829696001 | Peroxidase Labeling Kit | 1 kit (5 labeling reactions) |
| 4727894001 | G418 Solution, 100 ml | 100 ml (5 x 20 ml, equivalent to 5 g) |
| 11047825001 | Endoproteinase Lys-C Seq. Grad赖氨酸-C | 3 x 5 µg |
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文献和实验基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
MALDI-TOF-MS最初用于等分试样（1μL或更少）样品的质谱鉴定，用于检查肽的纯度或PMF。大批量的样品测定，往往使用Edman降解法测序或ESI-MS，如四极（Q）-TOF-MS 质谱。做出以上选择的原因，主要是因为MALDI技术进行分析，上样量不能超过0.5μL。这种样品制备方法极大地限制了MALDI技术检测的整体灵敏度，并且还限制了可以分析的肽浓度，因为肽和基质共结晶过程的质量对于检测的灵敏度和准确性都非常重要。MALDI技术通常将等体积的样品和MALDI基质溶液混合，将肽混合
；HPLC 级）。 ( 5 ) n-Octyl-glycopyranoside (n-OGP)。 ( 6 ) 测序级猪胰蛋白酶。虽然也可用其他优质的测序级猪胰蛋白酶，但为了均一性和方便，使用 Promega 公司的测序级猪胰蛋白可以优化实验方案和数据。 ( 7 ) 碳酸氢铵缓冲液：25 mmol/L 碳酸氢铵缓冲液，pH 7.8。 ( 8 ) 乙腈/碳酸氢铵缓冲液：50/50 (V/V) 乙腈/25 mmol/L 碳酸氢铵缓冲液( pH 7.8)。 ( 9 ) 消化缓冲
，将PCR 产物进行PAGE 纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序，便可解决。 问题图3（测序引物有碱基缺失） 测序引物有碱基缺失（一般是引物的5'端缺失），和模板的碱基缺失即图1 有些类似，所不同的是模板碱基缺失一般是在一段正常测序序列后才出现移码，而引物碱基缺失的话，则从测序一开始就出现移码，表面在图形上便是一开始就是严重的峰形重叠。 解决方法：重新合成引物，或将引物进行PAGE 纯化（注：好多公司虽然称提供的引物为PAGE级，但是，嘿嘿……） 2、克隆测序时出现峰形重叠
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