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- 保存条件:
2~8℃
- 保质期:
2年
- 英文名:
Sequencing grade modified recombinant trypsin
- 库存:
大量
- 供应商:
上海雅心生物
- 规格:
100ug,1mg,5mg
CAS: 9002-07-7
EC: 3.4.21.4
储存温度:2-8℃
别名:重组修饰胰蛋白酶;重组甲基化修饰胰蛋白酶;重组甲基化修饰突变胰蛋白酶
来源:重组胰蛋白酶,基因工程生产,大肠杆菌表达。
蛋白序列:氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。
1.产品简介
雅心重组胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致,无糜蛋白酶等杂酶污染,不含有且不需要TPCK抑制其他酶活性,活性高,酶切特异性高。胰蛋白酶容易自切产生自身自切片段影响质谱分析结果,甲基化修饰和突变保证其不自切,从而也去除了因自切而产生的假糜蛋白酶的活性。
2.产品特性
| 来源 | 重组大肠杆菌 |
| 外观 | 白色、类白色粉末 |
| 比活(单位/mg 蛋白) | ≥ 4500 |
| 蛋白电泳 | 单一主条带 |
| 电泳(分子量) | 24.0±2.4 kDa |
| 纯度(HPLC) | ≥95% |
3.推荐使用方法
建议使用50mMHAc或1mM HCl溶解或稀释。使用时,稀释在50mM NH4HCO3 或者ph7.0-8.0的缓冲溶液中。在酶切缓冲液中建议使用1mM CaCl2,重组胰蛋白酶:目的蛋白=1:20-1:100,最适PH为7.0-8.0。
4.储存和运输稳定性
储存稳定性:重组胰蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;使用50mMHAc或1mM HCl溶解后储存于-20℃,反复冻融5次,无活性损失。
运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。
5.产品优势
序列分析纯蛋白酶:特异性高,稳定性好。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。
质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产 品批次间无差异,质量稳定。
纯度高:比活高;宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
冻干粉:易于储存和运输。
符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。
质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
6.产品用途
重组胰蛋白酶具有与动物源性胰蛋白酶相同的酶学性质。可替代胰蛋白酶使用,且有很多优势,如无杂酶活性,高稳定性,不自切,高活性;在使用中,无非特异性酶切片段及自切片段出现。用于特异性的蛋白质酶解、蛋白测序、制作肽谱图、蛋白质组学研究、Z-D胶上的肽段的胰酶消化等。
7.相关产品(可直接点击下方超链接)
重组胰蛋白酶;
重组羧肽酶B;
重组肠激酶;
重组抑肽酶;
重组胰蛋白酶细胞消化液;
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文献和实验基于质谱的蛋白质鉴定,第6节:MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备
MALDI-TOF-MS最初用于等分试样(1μL或更少)样品的质谱鉴定,用于检查肽的纯度或PMF。大批量的样品测定,往往使用Edman降解法测序或ESI-MS,如四极(Q)-TOF-MS 质谱。做出以上选择的原因,主要是因为MALDI技术进行分析,上样量不能超过0.5μL。这种样品制备方法极大地限制了MALDI技术检测的整体灵敏度,并且还限制了可以分析的肽浓度,因为肽和基质共结晶过程的质量对于检测的灵敏度和准确性都非常重要。MALDI技术通常将等体积的样品和MALDI基质溶液混合,将肽混合
;HPLC 级)。 ( 5 ) n-Octyl-glycopyranoside (n-OGP)。 ( 6 ) 测序级猪胰蛋白酶。虽然也可用其他优质的测序级猪胰蛋白酶,但为了均一性和方便,使用 Promega 公司的测序级猪胰蛋白可以优化实验方案和数据。 ( 7 ) 碳酸氢铵缓冲液:25 mmol/L 碳酸氢铵缓冲液,pH 7.8。 ( 8 ) 乙腈/碳酸氢铵缓冲液:50/50 (V/V) 乙腈/25 mmol/L 碳酸氢铵缓冲液( pH 7.8)。 ( 9 ) 消化缓冲
,将PCR 产物进行PAGE 纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序,便可解决。 问题图3(测序引物有碱基缺失) 测序引物有碱基缺失(一般是引物的5'端缺失),和模板的碱基缺失即图1 有些类似,所不同的是模板碱基缺失一般是在一段正常测序序列后才出现移码,而引物碱基缺失的话,则从测序一开始就出现移码,表面在图形上便是一开始就是严重的峰形重叠。 解决方法:重新合成引物,或将引物进行PAGE 纯化(注:好多公司虽然称提供的引物为PAGE级,但是,嘿嘿……) 2、克隆测序时出现峰形重叠
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