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- Solarbio
- 北京
- P3100-10
- 2025年07月14日
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- 英文名：
pET-32a(+)plasmid
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大量
- 供应商：
Solarbio
- CAS号：
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- 规格：
10ug
pET-32a(+)质粒说明书
货号：P3100 规格：10ug 保存：-20℃保存，有效期至少5年产品简介： pET-32a(+)是一种常用的融合蛋白类型原核高效表达载体，含有抗氨苄青霉素基因。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。
宿主菌：建议克隆用E.coli DH5α或TOP10做受体菌；表达用E.coli BL21(DE3)或BL21(DE3)pLysS做受体菌。
质粒图谱:
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参考文献：
《TroCCL4, a CC chemokine of Trachinotus ovatus, is involved in the antimicrobial immune response》 作者:BaimingSunab1YangLeiab1ZhenjieCaoacYongcanZhouabYunSunabYingWuaShifengWangabWeiliangGuobChunshengLiu 期刊:Fish & Shellfish Immunology Pages:525-535 影响因子:3.185 PMID:30521967
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文献和实验编码区的基因片段，其由5'末端的stat密码子（ATG）和3'末端的终止密码子（TAA，TAG或TGA）结合。然后将目的基因片段插入pMD18-T载体中以构建重组质粒，通过DNA测序鉴定。用指定的酶消化重组pMD18-T质粒，并通过以下方案将检索到的目的DNA片段亚克隆到pET-32α（+）载体中以产生重组表达载体。将约129bp的TBO基因片段插入pET-32α（+）载体（5900bp）用相同的限制酶在37℃消化pET-32α（+）载体和重组pMD18-T载体1小时，然后通过在65℃温育10分钟
（ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
