SABC(兔IgG)-FITC kit

产品内容：

封闭液（5% BSA） 10ml

Bio-羊抗兔IgG浓缩液 100ul

SABC-FITC浓缩液 100ul

稀释液 30ml

抗荧光衰减封片剂 10ml

保存： 如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，稀释液和抗荧光衰减封片剂存放于2-8℃以方便使用。

产品简介：    本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验.，FITC荧光检测。    SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的FITC将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤：（微量试剂请离心后使用）

以石蜡切片热修复为例1. 切片常规脱蜡至水。2. 可选步聚：

a、热修复抗原，将切片浸入0.01M 柠檬酸钠缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10min后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.4）洗涤1-2次。

b、酶消化，滴加消化液，37℃10min，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2-3次。

c、跳过此步，直接进入下一步。3. 滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 孵育1h左右或20℃ 2h左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2min（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间）。5. 根据使用量,用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗兔IgG工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2min。6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液，20-37℃孵育30min(避光)。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5min。7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。    对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Trxiton X-100室温孵育20min， PBS漂洗两次，接上述第3步。    对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，再接上述第2步。

注意事项：    如果背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01%—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后封片观察。