Lowry法蛋白浓度测定试剂盒(1000T)

Lowry 法蛋白浓度测定试剂盒

Lowry 法蛋白浓度测定试剂盒说明书
货号：PC0030
规格：1000T(微孔)

保存：BSA 蛋白标准品 4℃保存有效期至少 3 个月，-20℃保存有效期至少一年，其他试剂室温保存有效期至
少一年。试剂开封使用后请及时密闭保存，Folin 酚乙试剂颜色变成深绿色即失效。
产品组成：
Folin 酚甲试剂 A 100ml×2
Folin 酚甲试剂 B 5ml
Folin 酚乙试剂(1N) 20ml
PBS 稀释液 30ml
BSA 蛋白标准品 (5mg/ml ) 1ml
产品简介：
Folin-酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步
是此络合物将 Folin 试剂还原， 产生深蓝色， 颜色深浅与蛋白质含量成正比。 定量范围为 5～100μg/ml 蛋白质。
Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干
扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
操作说明：
1.根据需要量，取适量 Folin 酚甲试剂 A 和 B 按 50:1 混合，混合后有效期为 24 小时，过期失效。
2.根据需要量，取适量 BSA 标准品用 PBS 稀释稀释 10 倍至浓度 0.5mg/ml。
若采用酶标仪法(96 孔)
3.将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul 加到 96 孔板中，加 PBS 补足到 20ul。
4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度)，加 20ul 到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，
标准线前面的点误差比较大，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
5.将配好的 Folin 酚甲试剂每孔加入 200ul，轻轻震动，混匀，室温放置 10 分钟。
6.各孔加入 20 微升 Folin 酚乙试剂，迅速混匀，37℃放置 30 分钟。用酶标仪测定 A650 计算蛋白浓度。
若采用分光光度计法（接上述步骤 2）
3.取八支（或者更多）5ml 离心管，标号，按 下表加入试剂。
4.混匀，37℃放置 30 分钟。分光光度计测定 A650 计算蛋白浓度。
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离心管号 1 2 3 4 5 6 7（样品管 1） 8（样品管 2） 9（样品管 3）
标 准 蛋 白
BSA
0 40ul 80ul 120ul 160ul 200ul 200ul 适当稀
释的样品 1
200ul 适当稀
释的样品 2
……
PBS 200ul 160ul 120ul 80ul 40ul 0 0 0 0
Folin 酚甲
试剂
2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
混匀，室温放置 10 分钟
Folin 酚乙
试剂
200ul 200ul 200ul 200ul 200ul 200ul 200ul 200ul 200ul