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- Solarbio
- 北京
- PC0010
- 2026年01月17日
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2-8度
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- 英文名：
Bradford蛋白浓度测定试剂盒(2500T)
- 库存：
大量
- 供应商：
Solarbio
- 规格：
2500微孔(100T)
bradford蛋白定量试剂盒产品内容：
| 组成 | 包装（2500微孔) | 保存 |
| 5×G250染色液 | 100ml | 2-8℃ |
| PBS稀释液 | 30ml | 2-8℃ |
| 蛋白标准(5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一．微孔酶标仪法 1. 完全溶解蛋白标准品，取10ul，稀释至250ul ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。 3. 将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。 4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。 6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。 二．分光光度计法 如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。步骤如下： 1. 取八支（或者更多）干净的10ml离心管，标记上号。 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。 3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10ml 5×G250染色液，加入40ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4. 按下表加入试剂(以每孔5ml计，多余的用来清洗比色皿)
| 离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7（样品管1） | 8（样品管2） | 9（样品管3） |
| 标准蛋白BSA | 0ul | 100ul | 200ul | 300ul | 400ul | 500ul | 500ul适当稀释的样品1 | 500ul适当稀释的样品2 | …… |
| PBS | 500ul | 400ul | 300ul | 200ul | 100ul | 0ul | 0ul | 0ul | 0ul |
| 1XG250染色液 | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
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文献和实验原理：这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465－595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。 溶液： ①Bradford储存液 100ml95％乙醇 200ml88％磷酸 350mgServaG蓝 室温下长期保持稳定。 ②Bradford
(一)实验原理双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法)，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置(lmax)，由465nm变为595nm，溶液的颜色
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