Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
中文名:Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
英文名:Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:2-8°C
产品说明:
Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将 Folin 试剂还原,产生深蓝色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为 5~100μg/ml 蛋白质。 Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干 扰作用。此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。
操作说明:
工作液制备
1.根据需要量,取适量 Folin 酚甲试剂 A 和 B 按 50:1 混合,混合后有效期为 24 小时,过期失效。
2.根据需要量,取适量 BSA 标准品用 PBS 稀释液稀释 10 倍至浓度 0.5mg/mL。
试管法(分光光度计法)
试管号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
BSA 蛋白标准品 |
0 |
40uL |
80uL |
120uL |
160uL |
200uL |
PBS稀释液 |
200uL |
160uL |
120uL |
80uL |
40uL |
0 |
Folin 酚甲试剂 |
2mL |
混匀,室温放置 10 分钟 |
Folin 酚乙试剂 |
200uL |
1.标准品按上表加入反应试剂。样品组试管做好标记,加适当稀释的样品200uL,Folin 酚甲试剂2mL,混匀,室温放置 10 分钟;加Folin 酚乙试剂200uL。
2.将上述标准品组合样品组分别混匀,室温放置 30 分钟。分光光度计测定 A650 计算蛋白浓度。
96 孔板法(酶标仪法)
1.将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20uL 加到 96 孔板中,加 PBS 补足到 20uL。
2.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度),加 20uL 到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点误差比较大,所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
3.将配好的 Folin 酚甲试剂每孔加入200uL,轻轻震动,混匀,室温放置 10 分钟。
4.各孔加入20uL Folin 酚乙试剂,迅速混匀,室温放置 30 分钟。用酶标仪测定 A650 计算蛋白浓度。
注意事项:
1.Folin酚乙试剂只在酸性条件稳定,故当其加到碱性的铜-蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏前,还原反应即能发生。
2.为了保证反应进行完全,反应可在25~30℃水浴中进行,反应30min后准时比色。
3.还原物质干扰本实验。
4. Lowry法的呈色物质组成尚未确定,它在红外区呈现较宽吸收峰。在550-750nm间吸光度均与蛋白质浓度成正比。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!