Lowry法蛋白浓度测定试剂盒

中文名:Lowry法蛋白浓度测定试剂盒

英文名:Lowry法蛋白浓度测定试剂盒

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8°C

 

产品说明：

Folin-酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将 Folin 试剂还原，产生深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为 5～100μg/ml 蛋白质。 Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干 扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。

操作说明：

工作液制备

 1.根据需要量，取适量 Folin 酚甲试剂 A 和 B 按 50:1 混合，混合后有效期为 24 小时，过期失效。

       2.根据需要量，取适量 BSA 标准品用 PBS 稀释液稀释 10 倍至浓度 0.5mg/mL。

试管法(分光光度计法)

试管号	1	2	3	4	5	6
BSA 蛋白标准品	0	40uL	80uL	120uL	160uL	200uL
PBS稀释液	200uL	160uL	120uL	80uL	40uL	0
Folin 酚甲试剂	2mL
混匀，室温放置 10 分钟
Folin 酚乙试剂	200uL

1.标准品按上表加入反应试剂。样品组试管做好标记，加适当稀释的样品200uL，Folin 酚甲试剂2mL，混匀，室温放置 10 分钟；加Folin 酚乙试剂200uL。

2.将上述标准品组合样品组分别混匀，室温放置 30 分钟。分光光度计测定 A650 计算蛋白浓度。

 

96 孔板法(酶标仪法)

    1.将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20uL 加到 96 孔板中，加 PBS 补足到 20uL。

    2.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度)，加 20uL 到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点误差比较大，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。

    3.将配好的 Folin 酚甲试剂每孔加入200uL，轻轻震动，混匀，室温放置 10 分钟。

    4.各孔加入20uL Folin 酚乙试剂，迅速混匀，室温放置 30 分钟。用酶标仪测定 A650 计算蛋白浓度。

注意事项：

     1.Folin酚乙试剂只在酸性条件稳定，故当其加到碱性的铜-蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏前，还原反应即能发生。

     2.为了保证反应进行完全，反应可在25～30℃水浴中进行，反应30min后准时比色。

     3.还原物质干扰本实验。

     4. Lowry法的呈色物质组成尚未确定，它在红外区呈现较宽吸收峰。在550-750nm间吸光度均与蛋白质浓度成正比。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！