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        Bradford法测蛋白浓度

        互联网

        5705

         

        原理:这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下,可配成淡红色的溶液,当与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。
        溶液:
        ①Bradford储存液
        100ml95%乙醇
        200ml88%磷酸
        350mgServaG蓝
        室温下长期保持稳定。
        ②Bradford工作液
        425ml双蒸水
        15ml95%乙醇
        30ml88%磷酸
        30ml Bradford储存液
        用滤纸过滤,保存于室温棕色瓶中,可保存数周,但在使用前需要过滤。
        ③配制1mg/ml牛血清蛋白(BSA)
        做标准曲线:

        表4.2 蛋白质浓度测定标准曲线制作表
        样品号
        蛋白量
        (ug) 标准溶液
        1mg/mlBSA(ul) 实验缓冲液
        (ul) Bradford
        试剂(ml) A595
        1 0 0 100 3 0
        2 2.5 2.5 97.5 3 0.120
        3 2.5 2.5 97.5 3 0.130
        4 5 5 95 3 0.250
        5 5 5 95 3 0.215
        6 7.5 7.5 92.5 3 0.331
        7 7.5 7.5 92.5 3 0.364
        8 10 10 90 3 0.460
        9 10 10 90 3 0.442
        10 12.5 12.5 87.5 3 0.531
        11 12.5 12.5 87.5 3 0.562
        12 15 15 85 3 0.633
        13 15 15 85 3 0.617
        14 17.5 17.5 82.5 3 0.684
        15 17.5 17.5 82.5 3 0.650
        16 20 20 80 3 0.721
        17 20 20 80 3 0.727

         

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