- ￥787 - 2937
- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海翌圣
- 36417ES
- 2025年10月15日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4度保存
- 保质期：
有效期2年
- 英文名：
Protein A/G MagBeads (IP Grade)
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
1mL(36417ES03)/5mL(36417ES08)
| 规格： | 1mL(36417ES03) | 产品价格： | ￥787.00 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5mL(36417ES08) | 产品价格： | ￥2937.00 |
rProtein A/G免疫沉淀磁珠使用“纳米表面生物技术”(S-TEC)，将rProtein A/G高密度定向包被到超顺磁性聚合物微球表面，具有更高的抗体结合能力和极低的蛋白非特异性吸附率，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度>90%的抗体，使用简便有效。
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄-球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG，但在两者结合特异性上有所不同。rProtein A/G免疫磁珠同时共价偶联了蛋白A和蛋白G，比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围，实用性更高。同时，本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品适用的范围广泛，可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。
产品信息
| 货号 | 36417ES03 / 36417ES08 |
| 规格 | 1 mL /5 mL |
产品性质
| 基质（Matrix spherical） | 聚合物磁性微球 |
| 配体（Ligand） | 重组蛋白A/G |
| 结合能力（Binding Capacity） | ＞50µg Rabbit IgG /mg磁珠 |
| 粒径（Particle size） | 1 µm |
| 磁珠浓度（Concentration） | 10 mg/mL |
| 储存缓冲液（Storage Buffer） | PBS, 0.01% Tween-20, 0.02% NaN3 |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
使用说明
工作液浓度应根据具体实验确定，建议进行预实验摸索最佳实验浓度。
- 缓冲液配制
裂解缓冲液：0.15 M NaCl, 50 mM Tris-HCl, 1% NP-40, pH7.4或WB/IP裂解液（Cat#20118ES）
平衡/结合/洗杂缓冲液：0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0
交联缓冲液：0.2 M 三乙醇-胺，pH8.2
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
交联剂：DMP(Dimetyl pimelimidate dihydrochloride)
终止液：50 mM Tris-HCl，pH 7.5
- 抗原样品制备
血清样品处理：若目标蛋白丰度较高， 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100µg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM）。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
贴壁细胞样品处理：移去培养基，用PBS清洗细胞两遍；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM）。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
大肠杆菌样品处理： 离心收集大肠杆菌（4℃, 12000g, 2 min），弃上清后称重， 按每克（湿重）菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次；按每克（湿重）菌体5-10 mL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂，重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清（4℃, 17000g, 10 min）。
- 磁珠预处理
- 将磁珠漩涡振荡1 min，使其充分混悬；
- 取50 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中，放置在磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃保护液。
- 加入200 µL结合缓冲液洗涤，进行磁性分离，吸弃上清，重复1次。
4. 抗体吸附
1) 加入目标抗体溶液（5-25 µg抗体总量），充分混匀，体积不足500 µL时用平衡液补足。
2) 室温孵育 10 min，可以振荡或漩涡混合均匀。
3) 将EP 管置于磁分离器上，待磁珠全部吸附后，吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。
4) 加入500 μL 洗杂液混合均匀，置于磁分离器上，待磁珠全部吸附后，吸弃上清液。重复洗杂至少 3次。
5. 抗体交联 (备选)
1）如果需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱，请忽略本步骤，直接进行操作6。 50μL-1mL 磁珠量均可以按照以下步骤操作，无需额外增加交联液体积。
2）加入 1 mL交联液，振荡悬浮，置于磁分离器上，大约1 min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。该操作重复两次。
3）再加入1mL含有20 mM DMP（dimetylpimelimidate dihydrochloride）的交联液， 此试剂需要现用现配。振荡悬浮，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管， 促使溶液和磁珠充分接触，约30 min后，置于磁分离器上，大约 1 min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。
4）使用1 mL终止液悬浮磁珠，终止交联反应，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管，促使溶液和磁珠充分接触，约15 min后，置于磁分离器上，大约 1 min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。
5）加入1 mL平衡液，颠倒混匀，置于磁分离器上，大约 1 min，待溶液变澄清后，吸弃上清液。再重复两次。
6. 抗原结合反应
1) 加入含有抗原的样品（通常100-1000 μL)，用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。
2) 在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10 min，使抗原与抗体充分结合，如结合力较弱则可在室温下反应1h或者在4℃下反应过夜。
3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离，收集上清液，以备后续检测。
4) 向离心管中加入1 mL洗杂液，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，弃上清液；从磁分离器上取下离心管，再重复洗涤两次。
7．抗原洗脱
A. 变性洗脱 此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。
1) 从磁分离器上取下离心管，向其中加入25μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀， 95℃加热 5min。
2) 置于磁性分离器上，进行磁性分离，收集上清液进行SDS-PAGE检测。
B. 非变性洗脱
1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入300 μL洗脱液，混合均匀，室温孵育10 min。
2) 置于磁性分离器上，进行磁性分离，收集洗脱液至新的 EP 管中。
3) 重复步骤 1）和2），收集洗脱液，与2）中洗脱液混合，加入中和液中和至 pH7.0-8.0。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20231020
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文献和实验[1] Jiang Y, Guo H, Tong T, et al. lncRNA lnc-POP1-1 upregulated by VN1R5 promotes cisplatin resistance in head and neck squamous cell carcinoma through interaction with MCM5. Mol Ther. 2022;30(1):448-467. doi:10.1016/j.ymthe.2021.06.006(IF:11.454)
[2] Cen Y, Zou X, Zhong Q, et al. The TIAR-mediated Nrf2 response to oxidative stress is mediated through the Nrf2 noncoding 3'untranslated region in Spodoptera litura. Free Radic Biol Med. 2022;184:17-29. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2022.03.016(IF:7.376)
[3] Zhenzhen L, Wenting L, Jianmin Z, et al. miR-146a-5p/TXNIP axis attenuates intestinal ischemia-reperfusion injury by inhibiting autophagy via the PRKAA/mTOR signaling pathway. Biochem Pharmacol. 2022;197:114839. doi:10.1016/j.bcp.2021.114839(IF:5.858)
[4] Meng J, Zhang C, Wang D, Zhu L, Wang L. Mitochondrial GCN5L1 regulates cytosolic redox state and hepatic gluconeogenesis via glycerol phosphate shuttle GPD2 [published online ahead of print, 2022 Jun 28]. Biochem Biophys Res Commun. 2022;621:1-7. doi:10.1016/j.bbrc.2022.06.092(IF:3.575)
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[6] Xiao Q, Dong ZQ, Zhu Y, et al. Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus (BmNPV) Induces G2/M Arrest to Promote Viral Multiplication by Depleting BmCDK1. Insects. 2021;12(12):1098. Published 2021 Dec 8. doi:10.3390/insects12121098(IF:2.769)
[7] Chen Y, Tang J, Lu T, Liu F. CAPN1 promotes malignant behavior and erlotinib resistance mediated by phosphorylation of c-Met and PIK3R2 via degrading PTPN1 in lung adenocarcinoma. Thorac Cancer. 2020;11(7):1848-1860. doi:10.1111/1759-7714.13465(IF:2.610)
[8] Mao H, Zhang X, Yin L, Ji X, Huang C, Wu Q. Silencing of circ_0007299 suppresses proliferation, migration, and invasiveness and promotes apoptosis of ectopic endometrial stromal cells in endometriosis via miR-424-5p-dependent modulation of CREB1 [published online ahead of print, 2022 Jun 16]. Arch Gynecol Obstet. 2022;10.1007/s00404-022-06650-w. doi:10.1007/s00404-022-06650-w(IF:2.344)
