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4-8°C
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6
- 供应商：
IBA Lifesciences
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1 kit
系列网课：https://h.dxy.cn/iba-dym/kz/course
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文献和实验Expi Supernatant 进行培养。 纯化过程中，选择柱体积为 0.2 ml 的三种纯化柱：Ni Sepharose 6 FastFlow, Ni Sepharose Excel, 和 Strep-Tactin®XT 4Flow®。 分别用其纯化 60CV (column volume, 柱体积) 和 120CV 的样品，并保持上样样品中的蛋白质含量在纯化柱最大结合载量 80%-95 %。 二、实验结果 01 对比蛋白质回收效率 对于不同的填料，可以从洗脱组分中回
了Strep-Tactin®，改进后得到的Strep-Tactin®XT (XT意指extreme tight)，与Twin-Strep-tag亲和力更上一层楼。目前得到的这个纯化系统，其中标签与配体的键结力几近共价，但结合仍保持可逆，更适用于样本体积大，或是膜蛋白、低丰度蛋白、金属蛋白等有挑战性蛋白的纯化了。 纯化步骤 总体来说，Strep标签蛋白的纯化步骤与传统的亲和层析纯化步骤并无太大差别，但优点是整个纯化在生理条件下进行，而且耐受多种的纯化条件，像是高盐、去垢剂、变性条件等均可使用。 值得
Strep-tag®：适用范围广 纯化选择多 由于 His-tag 系统使用 Ni 离子，所以在纯化金属蛋白（多数为酶）时，可能会受到金属间交互作用的干扰，而使用 Strep-tag® 则不会出现此问题，因 Strep-Tactin® XT 与 Strep-tag® 的特异性结合不受金属离子影响。且因其温和的纯化流程，所以还能用于纯化大型蛋白、多亚基的蛋白复合体或是跨膜蛋白，并且保持蛋白功能。以 Strep-tag® 系统纯化出不同的蛋白，下图为例： 图 1 依据研究项目的不同，各实验室使用
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