- ￥480 - 820
- Solarbio
- 北京
- P2010-10
- 2025年07月11日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8度
- 保质期：
现询客服
- 英文名：
His标签纯化树脂(50%浆料)
- 库存：
大量
- 供应商：
Solarbio
- 规格：
5ml/10ml
| 规格： | 5ml | 产品价格： | ￥480.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 10ml | 产品价格： | ￥820.0 |
Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF是用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由6%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得. 它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6×His可与Ni2+螯合，从而使His标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液的温和洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力，可达5-20 mg/ml。可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95％。Ni-NTA可再生4-6次，重复使用。本产品悬浮液为20％乙醇，已螯合Ni2+。
操作方法：
A. 非变性条件下抽提His标签蛋白
1) 准备细胞，接种，诱导表达。收集细胞，置于-70°C或立即进行步骤2操作。
2) 加入1/20细胞生长体积的NTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作浓度为1 mM现用现加。
3) 将细胞悬浮起来，加入溶菌酶，混匀，冰上放置30分钟，超声或匀浆破碎细胞。该步骤冰上操作。
4) 加入10% Triton X-100, 使终浓度为0.05%，充分混匀，冰上放置15分钟。
5) 12000 rpm/min(20,000×g以上)，4°C离心15分钟以上。取上清，置于冰上备用或-20°C保存。
6) 将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗。
7) 将样品加至NTA层析柱中，流速在15 ml/h左右，收集穿透部分，用SDS/PAGE分析蛋白的结合情况。
8) 层析用5倍NTA体积的NTA-0 Buffer洗，流速控制在30 ml/h左右。
9) 分别用5倍NTA体积的NTA-20、NTA-40、NTA-60、NTA-80、NTA-100、NTA-200、NTA-1000 Buffer洗脱，流速控制在15 ml/h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。
10) 确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是SDS-PAGE分析。也可以用Bradford 蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。
11)纯化的目标蛋白质的保存条件需要根据蛋白质的性质和用途确定。 NTA-0 、20、40、60、80、100、200、1000Buffer分别为浓度20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol，添加0、20、40、60、80、100、200、1000 mM Imidazole。
B.变性条件下从包涵体中纯化His标签蛋白
1) 准备细胞，接种，诱导表达。收集细胞，置于-70°C或立即进行步骤2操作。
2) 加入1/20细胞生长体积的GuNTA-0 Buffer和PMSF。PMSF使用的工作浓度为1 mM现用现加。
3) 将细胞悬浮起来，冰上超声破碎细胞，降低粘稠度。
4) 室温放置30分钟，间或混匀或用磁力搅拌。
5) 12000转/分（20,000×g以上），4°C离心15分钟以上。取上清，置于冰上备用或-20°C保存。
6) 将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗。
7) 将样品加到NTA层析柱中，流速控制在15 ml/h左右，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白质的结合情况。
8) 层析用5倍NTA体积的GuNTA-0 Buffer洗，流速控制在30 ml/h左右。
9) 分别用5倍NTA体积GuNTA-20、GuNTA-40，GuNTA-60、GuNTA-100、GuNTA-500洗脱，流速在15 ml/ h左右，收集洗脱液，每管收集一个NTA体积。
10) 确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是SDS/PAGE分析。也可以用Bradford 蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用SDS/PAGE分析蛋白质的分布。
11) 目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。
12) 纯化的目标蛋白质需要复性，复性常用的手段可以参考有关手册确定的原则。
GuNTA-0 、20、40、60、100、500Buffer分别为浓度20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,6 M Guanidium HCl添加0、20、40、60、100、500 mM Imidazole。
C. NTA树脂的再生
NTA树脂在使用若干次数（3-5次）后，结合效率有所下降，可以用以下方法再生，提高树脂的使用寿命和蛋白质的结合效率。
NTA树脂再生前需要从层析柱下端流干所有溶液，估计出NTA的树脂体积，按下列次序将再生试剂加到层析柱里，在等上一步再生溶液流干后，再加下一步再生溶解。
用户需要自行准备25%、50%、75%、100%（v/v）乙醇和去离子水。 从层析柱下端流干所有溶液，用2倍NTA树脂体积的Stripping Solution I、2倍体积的去离子水、3倍体积的Stripping Solution II、1倍体积的25%乙醇、1倍体积的50%乙醇、1倍体积的75%乙醇、5倍体积的100%乙醇、1倍体积的75%乙醇、1倍体积的50%乙醇、1倍体积的25%乙醇、1倍体积的去离子水、5倍体积的Stripping Solution III、3倍体积的去离子水分别洗一遍。
如果立即使用，用5倍体积的Ni Charging Solution洗，再用10倍体积的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗；如果想长期储存，加入1倍体积的20%乙醇，4°C保存，使用前用5倍体积的Ni Charging Solution洗，再用10倍体积的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗
再生溶液配方：Stripping Solution I: 6M GuHCl, 0.2M acetic acid。Stripping Solution II: 2% SDS。 Stripping Solution III: 100 mM EDTA, pH 8.0。Ni Charging Solution: 100 mM NiSO4
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验Science：延长小鼠寿命 50%！提升 VEGF 水平可
导读血管系统是机体所有器官共享的最大的细胞网络，体内的所有细胞都依赖于血管（Blood Vessels, BVs）提供氧气和其他营养物质，还要借助其清除废物。与其他器官一样，随着衰老，血管也会经历与功能下降相关的生物学过程。因此，与年龄相关的血管功能的丧失很可能会影响其他器官的生物学功能，从而引发「血管衰老论」，即血管老化是衰老的主要驱动因素。尽管有类似的假说，但实验证据仍然有限。「血管衰老论」主要基于血管功能的受损可能会扰乱器官内稳态，从而导致与年龄相关的衰弱和疾病的发生，包括动脉硬化、动脉
His 标签蛋白纯化效果不理想，宝宝心里苦呀。今天，小编来跟大家一起找找原因。 纯化所得组分中没有收集到重组的His标签蛋白。该问题主要可以分为以下两个方面： 1、His标签蛋白没有结合到填料上就流穿了 原因一 超声的功率不对。超声功率过高，容易导致蛋白炭化；功率过低，蛋白释放不出来。 建议 改变超声功率，同时可以在超声前加入溶菌酶。 原因二 结合缓冲液条件不合适。 建议 检查结合缓冲液中是否有影响结合的因素，如：金属离子螯合剂、强还原剂、过高的咪唑浓度。同时，优化缓冲液的pH、盐
男性寿命比女性短？新研究发现 25%~50% 男性比女性长寿，尤其是已婚和高学历的男性
199 个种群中死亡率的性别差异，结果发现，男性和女性的寿命分布存在大量重叠，有 25%～50% 的男性寿命比女性长，尤其是那些已婚并拥有大学学位的男性。这一发现补充了以平均寿命为基础得出的「女性更长寿」的结论。 图片来源：BMJ Open 主要研究内容 在这项工作中，研究人员使用 Outsurvival Statistic 这一统计方法，研究了 200 年来各大洲 199 个种群中死亡率的性别差异。量化了随着时间的推移，不同人群中男性比女性长寿的概率，并探讨了预期寿命变化和两性之间寿命
