- ￥700
- Solarbio
- 北京
- G7200
- 2025年07月16日
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- 保存条件：
2-8°C
- 保质期：
1年以上
- 库存：
现货
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- 规格：
20T
货号：G7200
规格：20T
保存：2-8℃, 避光保存, 有效期1年。溶液B避免火源，溶液A在低温下容易形成沉淀，请在使用前30℃加热，以促进溶解。
产品组成：
| 产品名称 | 规格 | 保存 |
| Buffer A | 10ml | 2-8℃ |
| Buffer B | 60ml | 2-8℃，避光 |
| 干粉 | 9.6g | 2-8℃ |
| DTT | 40mg | 2-8℃ |
产品说明： SDS-PAGE不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一，随着蛋白质技术的微量化，有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、氨基酸组分分析或末端序列测定等，本产品就是专门为此用途开发的微量蛋白胶回收法，本产品适用于从考染，铜染或锌染中回收蛋白质，回收效率在50-80%，能够使用20次。
产品特点：
- 简单，不需要复杂而昂贵的仪器（如电洗脱仪）。
- 适用于变性胶（SDS-PAGE）和非变性胶（Native-PAGE）。
- 回收率一般在50-80%之间（跟蛋白质大小，洗脱时间相关）。
- 跟后续的实验兼容，包括1-D、2-D电泳和质谱测序等。
- 用手术刀片将铜染或锌染的胶块中含有目的条带的部分胶切下，放入1.5mL的离心管中，用相应的消除液将胶中蛋白质条带脱色到胶体接近无色，室温12000 rpm（12830 g），离心5 min，尽量去除上清，保留胶体。
- 对于考染或其他考染方法，直接将不需要脱色液脱色的或经过脱色液脱色的胶块中含有目的条带部分切下，放入1.5mL 的离心管中，用双蒸水洗两次，每次5min，再进行步骤2。
- 用研磨杆将离心管中的胶体研磨成细小的碎片，加入400μL的溶液A，在室温条件下，脱色摇床上震荡过夜（16-18小时），期间取出，偶尔震荡几次。
- 室温12000 rpm，离心15 min，转移上清到另外一个2mL的离心管中，加入2 mL 的预冷的溶液B，混匀，4℃放置30 min。
- 室温12000 rpm，离心15 min，去除上清，再将离心管放置在通风厨中，待残留的液体挥发干净。
- 也可以再次加入0.5 mL 的溶液B，震荡洗涤沉淀，4℃放置15 min，再重复步骤4 一到两次，这样得到的蛋白质更纯净。
- 选用合适的缓冲液溶解沉淀的蛋白质，以方便进行后续的电泳和质谱测序等实验。
- 在保证完全切取到目的蛋白质后，尽量去除多余的胶片。
- 如果蛋白质的分子量较大，所加样的量较多，胶浓度比较大，可以适当延长温育时间。
- 为了有比较好的回收效果，在进行胶中蛋白质回收时，每个点样孔中所加的蛋白质量最好在2μg-40μg 之间。
- 采用含有Urea、Thiourea、SB3-10等强溶解能力试剂的溶解液有助于沉淀蛋白的完全溶解。
- 研磨杆研磨碎片时，越充分越好，这样有利于蛋白质扩散到溶液A中。
- 采用此试剂盒进行胶回收时，一般不建议采用银染，因为此时回收效率较低。
- 目的蛋白回收效率与蛋白的分子量大小有一定的关系，在10KD以下的多肽回收效率明显降低，如果大于120KD，则需要增加步骤2中的震荡过夜时间。
- 如果在制浓缩胶时不加梳子，将蛋白溶液均匀的铺在浓缩胶面上进行电泳，之后将整个胶块从左到右的一条完整的目的蛋白条带切下回收，则需要按照常规梳子上所带点样孔的数量，将所用试剂按照倍数增加。
- 所加溶液A和溶液B的体积需要保持一定的比例关系，溶液B 的体积必须是溶液A体积5倍或5倍以上，以避免在步骤3的过程中产生不必要的杂质沉淀。
- 过程中所加试剂量是针对80×60×1mm 凝胶而定，若体积较大，可适当增加各溶液的体积。
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文献和实验江janice 求助：用的是天根 的胶回收试剂盒，11管PCR产物，差不多500微升的总体积，上四个孔电泳，电泳后用天根的盒子回收到四个EP管，每管40微升，取5微升电泳，居然没有成功，又取10微升电泳还是没有任何条带，不知道可否有人用天根的盒子，是否遇到这方面的问题，一般100微升的PCR产物，回收到多少体积比较恰当，纠结啊，回收了好几次电泳都没有目的条带，盒子是刚买的新盒子，谢谢好心人帮助 大鹏鸟 天根的盒子还是很好
公司的Geba小管子可以专门对付PAGE胶电泳，用的是电洗脱的原理，能令操作容易得率提高，不过还是需要耗时甚久。加上这以色列公司已经几经转手，负责销售此产品的基因有限公司的员工显然也不太熟悉这可爱的小东西，每每出现一问三不知的情况，使得购买相当不方便。 实验人员的智慧是无穷的。一众Qiagen的拥趸们在“享受”了QiaQuick Gel Extraction Kit的畅快使用感后，等来等去又等不到厂家推出PAGE胶专用的试剂盒，于是开始自行摸索用这个琼脂糖凝胶回收试剂盒来回收PAGE胶
。用于纯化标记反应是不错的选择，方法和PCR产物回收试剂盒是一样的，很方便。除了这种膜吸附的柱子，还有一种凝胶过滤原理的柱子也可以用于分段收集不同大小的产物，那个在建库等实验中用的比较多，也有用于纯化标记反应中的未标记分子或者核苷酸的。很小的DNA 片断常常会用PAGE胶电泳。PAGE胶好像还没有很好的溶解方法，除了我们前面提到的电洗脱，Qiagen还提供一些私人方法，在应急的时候可以尝试。将切割下来的PAGE条带冲洗后加入指管中，加入2倍体积的分散缓冲液（0.5M醋酸胺、10mM的醋酸镁，1mM
